PD-L1在非小细胞肺癌原发灶及外周血循环肿瘤细胞中的表达与分析

发布时间：2020-06-06 04:26

【摘要】：第一部分非小细胞肺癌免疫微环境中PD-L1、CD47表达及免疫细胞浸润情况目的:本研究旨在通过回顾性分析NSCLC术后肿瘤组织标本中免疫检查点PD-L1、CD47表达,以及CD8+T细胞、巨噬细胞浸润情况,探究NSCLC肿瘤微环境中免疫抑制特征,及其与患者临床病理特征及预后的相关性。材料与方法:回顾性收集2009年1月1日至2012年12月31日北京协和医院收治的NSCLC术后肿瘤组织蜡块,共191例。采用免疫荧光双染法分别进行PD-L1/CD8染色、CD68/CD163染色,评估T细胞免疫检查点PD-L1表达,及其与CD8+T细胞、M1型巨噬细胞(CD68+CD163-)、M2型巨噬细胞(CD68+CD163+)的相关性;采用免疫组化法进行CD47染色,评估巨噬细胞免疫检查点CD47表达。结果:PD-L1和CD47在非小细胞肺癌肿瘤组织中的阳性率分别为55.5%(106/191)和53.4%(102/191)。PD-L1在鳞癌中阳性率显著高于腺癌(63.0%vs 48.5%,P=0.043),与其他临床病理特征无显著相关性。CD47在腺癌、女性、不吸烟、IIIA期患者中阳性率显著升高(P0.001,P=0.002,P=0.008,P=0.035)。此外,PD-L1阳性表达与M2型巨噬细胞浸润、CD8+T细胞浸润均密切相关(P=0.015;P0.001),而CD47与巨噬细胞、CD8+T细胞浸润之间无相关性。PD-L1与CD47之间无相关性。预后分析显示,PD-L1阳性或PD-L1/CD8双阳性表达与DFS之间无相关性;CD47阳性患者的 DFS 显著高于 CD47 阴性者(22.03 ms vs 34.77 ms,P=0.021)。结论:PD-L1在肺鳞癌中高表达,且往往伴有CD8+T细胞、巨噬细胞大量浸润;而CD47在IIIA期、女性、不吸烟的肺腺癌中高表达,与PD-L1、肿瘤相关免疫细胞浸润无显著相关性。IIIA期NSCLC中,PD-L1与患者的DFS未证实存在相关性,而CD47阳性则提示患者DFS较差。第二部分:外周血循环肿瘤细胞检测在非小细胞肺癌预后及疗效评价中的预测价值目的:本研究旨在通过检测晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)水平,探究CTC在晚期NSCLC临床疗效及预后中的预测价值。材料与方法:前瞻性纳入2012年1月1日至2015年12月31日北京协和医院肺癌中心收治的170例ⅢB及Ⅳ期NSCLC患者,并根据基线时治疗方案分为化疗组和靶向组。采用Cyttel检测系统检测所有患者外周血基线CTC水平,凡≥2个/3.2ml外周血判定为阳性,以8个/3.2ml外周血为阈值,探究基线CTC数目与NSCLC患者临床疗效及预后之间的相关性。随访化疗组患者治疗后CTC,分析CTC动态变化趋势,探究其预测及预后意义。结果:170例非小细胞肺癌患者CTC检出率为82.4%(140/170),基线CTC水平与患者临床特征无显著相关性。无论化疗组还是靶向组,基线CTC数目8个/3.2ml的患者中位 0S(化疗组,20.0 ms vs 10.4 ms,P0.001;靶向组,21.0 ms vs 17.7 ms,P=0.013)和中位 PFS(化疗组,7.2 ms vs 5.5 ms,P=0.009;靶向组,11.6 ms vs 8.5 ms,P=0.004)均显著高于基线CTC数目≥8个/3.2ml的患者。单因素和多因素分析显示基线CTC数目是影响患者PFS和0S的独立预测因子。随访化疗组患者(n=73)每程化疗前CTC水平,结果显示2程化疗后CTC数目升高患者的中位PFS和中位OS均低于未升高者(PFS,5.2 ms vs 6.4 ms,P=0.022;0S,12.0 ms vs 13.3 ms,P=0.028),此外,CTC 升高组的 2 程后疾病进展(progressive disease,PD)比例显著高于未升高组(15.6%vs 2.4%,P=0.042)。结论:对于晚期NSCLC,采用Cyttel检测系统检测基线CTC水平≥8个/3.2ml的患者临床预后较差;化疗后CTC持续升高的患者PD发生率升高,OS和PFS亦较短。CTC基线水平及其治疗后动态变化可以作为晚期NSCLC的疗效及预后评估的一项重要临床预测指标。第三部分非小细胞肺癌患者外周血循环肿瘤细胞PD-L1表达及CD8+T细胞检测目的:本研究通过前瞻性纳入北京协和医院收治的初治及进展非小细胞肺癌患者,在Cyttel-CTC检测基础上,进行PD-L1及CD8免疫荧光染色,旨在评估NSCLC患者外周血CTC中PD-L1表达及CD8+T细胞浸润水平。材料与方法:前瞻性纳入2017年8月1月至2018年3月15日北京协和医院肺癌中心收治的44例Ⅲ及Ⅳ期NSCLC患者。于基线治疗前采集受试者外周血,利用Cyttel检测技术完成CTC富集同时进行外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PMBC)涂片,使用PD-L1蛋白检测试剂盒检测CTC中PD-L1蛋白表达水平,同时PMBC涂片后染色以检测CD8+T细胞。收集并检测配对肿瘤组织样本中PD-L1表达情况。结果:44例NSCLC患者中外周血CTC总检出率为86.4%(35/44),其中,25例检测到不同程度PD-L1蛋白表达。其中,PD-L1呈弱阳性表达(+)12例,中等阳性表达(++)7例,强阳性表达(+++)6例。PD-L1表达与患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、TNM分期、突变状态、转移数量及检测前1年内治疗情况均无统计学相关性。外周血瘤细胞PD-L1表达阳性的样本中CD8+T细胞比例较高,但两者之间相关性未见统计学意义。配对组织检测结果(n=25)显示组织PD-L1阳性比例≥30%的患者检测到CTC呈PD-L1“+”或“++”阳性表达;阳性比例低(30%)或阴性的患者CTC中PD-L1多呈“+”阳性或阴性表达。结论:Ⅲ及Ⅳ期NSCLC患者外周血CTC的PD-L1阳性率较高,且与组织PD-L1表达特点和模式相近,PD-L1阳性者往往伴有CD8+T细胞浸润。CTC检测可作为研究NSCLC患者肿瘤免疫抑制信息的重要途径,协助临床免疫治疗。
【图文】：

研宄结果逡逑１、患者信息逡逑共１９１例ＮＳＣＬＣ患者，以及４７例肺部感染患者最终纳入本研究（图１）。逡逑ＮＳＣＬＣ组中，Ｉ期淲癌４６例，Ｉ期腺癌５０例，，ＩＩＩＡ期淲癌４６例，１１ＩＡ期腺癌逡逑４９例。１９１例ＮＳＣＬＣ患者和９５例Ｉｌｉａ期患者的临床病理特点分别见表１和表逡逑２。所有Ｉ期患者均未接受术后辅助化疗。所有Ｉｌｉａ期患者均接受４程术后辅逡逑助化疗，化疗方案为长春瑞滨＋顺柏（ｎ＝５９）或紫杉醇＋卡铀（ｎ＝３６）邋；邋Ｎ２阳性逡逑的患者均接受术后辅助放疗。出现终点事件（肿瘤复发或死亡）或末次随诊前，逡逑无患者接受分子靶向药物治疗。对照组中，肺结核３５例，肺曲霉球９例，肺隐逡逑球菌病３例。逡逑｜组：非小细胞肺癌组逦＿邋Ｍ组：肺部感染组（对照组）逡逑入组标准：经舰X1麟咖Ｓ〔１Ｘ；邋Ｉ邋Ｏｆ邋ＩＩＩＡ期；逦人r-标，：＾手术病灥娜＾染；＾合并逡逑行根治性切除术；术前未接受放化疗；未合并感逦或恶性胂瘤；术前未曾接受抗感逡逑染性或自身免疫性疾病逦—或激累；口？Ｔ逡逑样本收集：手术病理组织石蜡切片逡逑ｉ除标准：逡逑逦ｊ逦

２、ＰＤ－Ｌ１表达检测逡逑１９１例ＮＳＣＬＣ组织中，１０６例（５５．邋５％）在肿瘤细胞细胞膜检测到ＰＤ－Ｌ１阳逡逑性表达（图２）；同时，１０８例（５６．５％）在浸润于肿瘤灶的免疫细胞细胞膜也检逡逑测到ＰＤ－Ｌ１阳性表达。其中，３８．７５％样本（１１＝７４／１９１）中癌细胞与免疫细胞均表逡逑达邋ＰＤ－Ｌ１，邋１６．８％（Ｎ＝３２／１９１）仅癌细胞表达邋ＰＤ－Ｌ１，邋１７．８５（ｎ＝３４／１９１）仅免疫细胞逡逑表达ＰＤ－Ｌ１。对照组中，３２例（６８．邋１％）观察到免疫细胞ＰＤ－Ｌ１表达。我们进一逡逑１５逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

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本文编号：2699161