MiR-377-3p介导EGR1表达下调促进BPDE诱导的BEAS-2B细胞的恶性转化

发布时间：2020-06-10 10:07

【摘要】：环境中的多环芳烃(PAHs),尤其是苯并[a]芘(B[a]P)是肺癌发生的重要危险因素,促进肺癌的发生和发展。然而,B[a]P诱导细胞恶性转化和肿瘤发生发展的早期分子机制尚不清楚。本研究首先建立了 B[a]P活性代谢产物BPDE诱导的人支气管上皮细胞恶性转化模型,结合RNA-Sequencing发现早期调控因子EGR1表达下调;qRT-PCR及免疫印迹等实验进一步证明EGR1基因在BPDE诱导的细胞恶性转化中发生持续的表达下调;此外,B[a]P诱导的小鼠肺原位肿瘤组织和临床人肺癌组织中均发现EGR1的显著低表达,提示其抑癌作用。外源过表达EGR1抑制BPDE诱导的转化细胞的恶性表型。进一步研究结果表明,miR-377-3p在恶性转化细胞及B[a]P诱导的小鼠肺原位肿瘤组织中显著上调,且miR-377-3p特异性靶向EGR1基因的3'UTR介导其表达下调,进而调控BPDE诱导的细胞的恶性转化。EGR1表达水平与临床肺癌组织病理指标分析显示人肺癌组织中的EGR1低表达与人肺癌的侵袭、淋巴结转移、TNM分期、恶性分化程度相关,提示EGR1在人肺癌发展过程中的重要调控作用。本研究表明了 EGR1在B[a]P诱导细胞恶性转化,乃至肺癌形成过程中的重要作用,揭示其表达持续下调的分子机制。本研究对进一步探索环境化学物质诱发细胞恶性转化乃至肿瘤形成的作用机理具有重要意义,并为提出新的干预切入点和手段提供科学依据。
【图文】：

（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）。根据ｐ值＜０．０５，倍数变化＞２的筛选标准，选取ＲＮＡ－Ｓｅｑ分析结逡逑果中的显著差异基因。结果显示，在分析得到的差异表达基因中，ＥＧＲ１基因的逡逑ｍＲＮＡ水平变化最显著（图３．４）。结果提示，ＥＧＲ１可能是参与调控ＢＰＤＥ诱导逡逑ＢＥＡＳ－２Ｂ细胞恶性转化过程的关键基因。逡逑１６逡逑

Ｉ１００＇逡逑＾逦°逦５逦１０逦１５逦２０逦２５逦３０邋（Ｄａｙｓ）逡逑图３．３邋ＢＰＤＥ处理使ＢＥＡＳ－２Ｂ细胞具有皮下成瘤能力逡逑将对照组和ＢＰＤＥ处理姐ＩＸ邋１０７个细胞分别与Ｍａｔｒｉｇｅｌ以１：１的比例混合，以总体积１０（）逡逑ＵＬ进行ＢＡＬＢ／Ｃ裸鼠的皮下注射。上图为裸鼠皮下移植瘤实验结束时所拍摄的照片。下图逡逑为瘤块体积增长的统计学分析，横坐标为天数，纵坐标为瘤块体积。１５天后，对照组瘤块消逡逑失，无法达到测量标准。（＊＊Ｐ＜０．０１）逡逑３．２邋ＥＧＲ１在ＢＰＤＥ诱导的ＢＥＡＳ－２Ｂ细胞恶性转化模型中表达下调逡逑３．２．１邋ＢＰＤＥ诱导ＢＥＡＳ－２Ｂ细胞恶性转化差异表达基因的筛选逡逑为揭示参与调控ＢＰＤＥ诱导的ＢＥＡＳ－２Ｂ细胞恶性转化的关键基因，首先提取逡逑对照姐及恶性转化处理组细胞的完整ＲＮＡ，送至诺禾致源公司进行转录组测序逡逑（ＲＮＡ－Ｓｅｑ）。根据ｐ值＜０．０５，倍数变化＞２的筛选标准，选取ＲＮＡ－Ｓｅｑ分析结逡逑果中的显著差异基因。结果显示，，在分析得到的差异表达基因中，ＥＧＲ１基因的逡逑ｍＲＮＡ水平变化最显著（图３．４）。结果提示
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2

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本文编号：2706142