ADAM17在肝癌转移中的作用及其调控机制探究

发布时间：2020-06-12 05:20

【摘要】：原发性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)在世界范围内尤其在我国是最常见的死亡率最高的恶性肿瘤之一。HCC发生的最主要的原因是乙型肝炎病毒(HBV)感染。乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)是HBV编码的病毒蛋白,在HBV相关肝癌的发生、发展、转移过程中具有重要作用。转化生长因子β(TGF-β)是一种广泛参与包括肝癌在内的多种生物学进程的细胞因子。去整合素金属蛋白酶17(ADAM17)是一种多结构域的膜蛋白,它在多种恶性肿瘤组织中异常表达,与肿瘤的转移过程密切相关。近年来,越来越多的研究发现,HBx蛋白与TGF-β在HCC的进程中可以相互影响,共同促进疾病进展,但具体分子机制并不十分清楚。本文旨在探索HBx激活TGF-β信号通路下游ADAM蛋白进而影响HCC发生的机制。首先,我们通过免疫组化检测了肝癌临床样本及癌旁组织中HBx与TGF-β通路下游靶基因ADAM17的表达情况,发现二者均在肝癌组织中高表达,且表达具有正相关性。接下来在肝癌细胞株中梯度转染HBx表达质粒,发现ADAM17的表达随HBx转染量增加而升高。在此基础上,我们采用双荧光素酶报告基因系统检测发现HBx能够显著激活ADAM17的启动子。上述结果表明,肝癌细胞中ADAM17的过表达可能与HBV病毒自身编码的HBx蛋白的表达有关。接下来为了验证HBx影响ADAM17表达的分子机制,首先我们采用TGF-β1与SIS-3联用处理肝癌细胞,Westernblot检测ADAM家族蛋白的表达,发现ADAM17的表达明显受TGF-β1/Smad3通路的影响。进一步检测发现HBx与TGF-β1能够共激活TGF-β1信号通路与ADAM17的表达。蛋白质免疫共沉淀检测结果显示,HBx可以与TGF-β1通路中Smad家族蛋白相结合。接下来我们构建AP-1沉默的肝癌细胞株,检测发现抑制肝癌细胞中AP-1表达能够促进ADAM17的表达,报告基因实验进一步检测发现HBx和TGF-β1能够逆转AP-1对TGF-β信号通路的抑制情况。本部分结果表明,肝癌细胞中ADAM17的表达可能受HBx介导的TGF-β1信号通路的激活。最后,我们建立了ADAM17沉默的肝癌稳定细胞株,检测发现沉默肝癌细胞中ADAM17的表达能够显著抑制细胞的增殖与迁移能力。小动物活体成像与病理染色结果显示,抑制ADAM17的表达能够明显降低肝癌细胞的转移。结果说明,ADAM17的表达与肝癌细胞的转移关系密切。综上所述,本研究发现HBx通过激活TGF-β信号通路调控ADAM17的表达,进而影响肝癌细胞的增殖与转移。揭示了HBx在肝癌发生发展过程中的作用,首次发现ADAM17在肝癌细胞中表达的可能调控机制,为人类对恶性肿瘤致癌机制的认识,乃至新型靶向药物的开发,均具重要的参考价值
【图文】：

信号通路,家族,蛋白

TGF-β信号通路图

图 2.2ADAM17 在肝癌及癌旁组织中的表达情况Fig.2.2 Protein levels of ADAM17 in HCC tumors and paracancerous tissues.(a) IHC staining of HBx in HCC tumors and paracancerous tissues. (b) ADAM17 protein levels are elevat-ed in HCC tumors. The protein expression was scored by Immunoreactivescore (IRS). (c) Statistical anal-
【学位授予单位】：华侨大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7

【参考文献】