POU5F1B通过激活AKT，miR-660通过抑制PPP2R2A促进肝细胞癌的增殖
发布时间：2020-06-12 20:08
【摘要】：第一部分:POU5F1B通过激活AKT促进肝细胞癌的增殖目的:检测POU5F1B在肝细胞癌(HCC)中的表达,并探究其在促进肝细胞癌增殖过程中的调控机制。方法:使用TCGA数据库来分析POU5F1B与肝细胞癌的发展的相关性。通过MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验,检测POU5F1B的过表达对肝癌细胞的增殖影响及其对AKT的的调控。收集贵州医科大学附属医院的肝细胞癌患者及正常的肝组织,通过蛋白质印迹法及实时荧光PCR实验检测组织中POU5F1B的表达水平与Cyclin D1、p21和p27的表达水平,及AKT磷酸化水平的相关性。结果:TCGA数据库分析显示POU5F1B在肝癌细胞和组织中表达明显的上调,高表达POU5F1B的肝癌患者的总生存时间明显低于低表达POU5F1B的肝癌患者。MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验的结果显示POU5F1B的过表达可促进肝癌细胞的增殖,而敲低POU5F1B会抑制肝癌细胞的增殖。且POU5F1B可以激活AKT,在肝癌细胞中过表达POU5F1B的情况下抑制AKT,相比于单纯过表达POU5F1B的细胞,可以明显抑制肝癌细胞的增殖,说明POU5F1B是通过激活AKT促进肝癌细胞增殖。在获取的肝癌组织样本中检测发现,POU5F1B的表达水平与Cyclin D1的表达水平呈正相关,而与p21和p27的表达水平及AKT磷酸化水平呈负相关。结论POU5F1B通过激活AKT促进肝癌细胞增殖,可以为肝细胞癌的治疗提供新的靶点。第二部分:miR-660通过抑制PPP2R2A促进肝细胞癌的增殖目的:检测miR-660在肝细胞癌(HCC)中的表达,并探究其在促进肝细胞癌增殖过程中的调控机制。方法:使用TCGA数据库来分析miR-660与肝细胞癌的发展的相关性。通过实时荧光PCR实验检测了miR-660在多种肝癌细胞及组织中的表达。通过MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验,检测miR-660的过表达对肝癌细胞增殖的影响及对PPP2A2R的调控。通过萤光素酶报告基因测定,实时荧光PCR实验和蛋白质印迹法检测miR-660对PPP2A2R的调控。通过实时荧光PCR实验检测miR-660与CCND1和p21表达的关系。结果:TCGA数据库分析显示miR-660在肝癌细胞和组织中表达明显上调。实时荧光PCR实验发现miR-660在多株肝癌细胞中表达上调。MTT实验、软琼脂生长实验、Brd U掺入法实验和细胞周期实验的结果显示miR-660的过表达可促进肝癌细胞的增殖,而敲低miR-660敲低会抑制肝癌细胞的增殖,且miR-660可以抑制PPP2R2A的水平,荧光素酶实验检测到miR-660与PPP2R2A的3’-UTR直接结合。实时荧光PCR实验的结果显示miR-660抑制p21表达并促进CCND1表达。通过软琼脂生长实验和Brd U掺入法实验证明敲低miR-660后同时敲低PPP2R2A可以促进Hep G2增殖。结论:miR-660可通过靶向PPP2R2A促进肝癌的增殖,可能成为肝癌治疗的新靶点。
【图文】：
图 1.人类 OCT4 基因的结构图[87]Oct4 在早期胚胎中的表达母鼠体内，保存在卵母细胞中的 Oct-4 mRNA 和蛋白质（352a.a.）是由合子遗并且是发育至 4 细胞期所必需的。蛋白质在小鼠胚胎发生的这些早期阶段以低水平在。合子 Pou5f1 基因的转录在 4 至 8 个细胞阶段被激活。因此，在桑椹胚期前，有卵裂球中都可以检测到高水平表达的 Oct-4 蛋白。在胚泡形成后，，Oct4 的表达在细胞团（Inner Cell Mass，ICM）中保持高水平，并且不在滋养外胚层（ TrophectodermTE）中表达。在植入小鼠胚胎后，在一组 ICM 细胞中瞬时上调 Oct4 触发它们分化原始内胚层（hypoblast）细胞。随后，Oct4 表达在这些细胞中下调[23-25]。在原肠胚成期间，Oct4 被下调，在怀孕第 8 天后，它被限制在原始生殖细胞中[24,26,27]。在体外Oct4 在未分化的胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell，ECS）、胚胎癌细胞（ EmbryoCarcinoma，EC）和胚胎生殖细胞中高度表达。在白血病抑制因子（LIF）戒断或视
miR-660 通过抑制 PPP2R2A 促进肝细胞癌的增值 第二章 实验结果U5F1B 的高表达意味着肝癌患者的不良预后示 POU5F1B 在肝细胞癌发生发展过程所扮演的角色，我来分析 POU5F1B 在肝癌组织中和正常肝组织中的表达水354 例肿瘤组织进行对比，结果提示 POU5F1B 在肝细胞癌图 2)。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
本文编号：2710047
【图文】：
图 1.人类 OCT4 基因的结构图[87]Oct4 在早期胚胎中的表达母鼠体内，保存在卵母细胞中的 Oct-4 mRNA 和蛋白质（352a.a.）是由合子遗并且是发育至 4 细胞期所必需的。蛋白质在小鼠胚胎发生的这些早期阶段以低水平在。合子 Pou5f1 基因的转录在 4 至 8 个细胞阶段被激活。因此，在桑椹胚期前，有卵裂球中都可以检测到高水平表达的 Oct-4 蛋白。在胚泡形成后，，Oct4 的表达在细胞团（Inner Cell Mass，ICM）中保持高水平，并且不在滋养外胚层（ TrophectodermTE）中表达。在植入小鼠胚胎后，在一组 ICM 细胞中瞬时上调 Oct4 触发它们分化原始内胚层（hypoblast）细胞。随后，Oct4 表达在这些细胞中下调[23-25]。在原肠胚成期间，Oct4 被下调，在怀孕第 8 天后，它被限制在原始生殖细胞中[24,26,27]。在体外Oct4 在未分化的胚胎干细胞（Embryonic Stem Cell，ECS）、胚胎癌细胞（ EmbryoCarcinoma，EC）和胚胎生殖细胞中高度表达。在白血病抑制因子（LIF）戒断或视
miR-660 通过抑制 PPP2R2A 促进肝细胞癌的增值 第二章 实验结果U5F1B 的高表达意味着肝癌患者的不良预后示 POU5F1B 在肝细胞癌发生发展过程所扮演的角色，我来分析 POU5F1B 在肝癌组织中和正常肝组织中的表达水354 例肿瘤组织进行对比，结果提示 POU5F1B 在肝细胞癌图 2)。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 Miriam J Alter;;Epidemiology of hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2007年17期
2 ;Stem cell pluripotency and transcription factor Oct4[J];Cell Research;2002年Z2期
本文编号：2710047
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