循环肿瘤细胞上皮间质转化与结直肠癌临床相关性研究

发布时间：2020-06-15 19:34

【摘要】：目的研究循环肿瘤细胞(CTCs)及其上皮间质转化(EMT)与结直肠癌临床资料的相关性。方法收集2016.03.01-2017.3.31在广东省人民医院普外一区(胃肠专业组)行手术治疗并接受CTCs检测的结直肠癌患者的临床资料,采用CanpatrolTM二代CTC检测技术分别于术前2h、术后2周检测患者的CTCs、并用EMT标记物进行CTC分型,分析CTC及其不同表型与患者临床资料的相关性。结果共收集到68例合乎要求的结直肠癌患者,其中男性39例,女性29例;≥60岁33例,60岁35例;右半结肠癌14例,左半结肠癌23例,直肠癌31例;肿瘤直径5cm 44例,≥5cm 24例;按TNM临床分期:Ⅰ期7例、Ⅱ期14例、Ⅲ期35例、Ⅳ期12例;Ⅲ期患者中转移淋巴结≤枚17例,3枚18例。CTCs可以分成上皮型、间质型及上皮间质转化的过渡状态三种类型;85.29%(58/68)的患者术前检测出CTCs,其中EMT型及间质型CTCs比例明显高于上皮型,差异有统计学意义(P0.05);患者年龄≥60岁组与60岁组之间、男女之间CTCs检出率及各亚型的比较差异均无统计学意义(P0.05);右半结肠癌患者总CTCs、EMT型及间质型CTCs的平均检测值均高于左半及直肠癌患者,差异有统计学意义(P0.05);但右半、左半及直肠癌三组患者之间上皮型CTCs的差异无统计学意义(P0.05);肿瘤最大直径5cm及≥5cm二组患者之间CTC检出率的差异无统计学意义(P0.05),肿瘤最大直径≥5cm患者总CTCs、EMT型及间质型CTCs的平均检测值均略高于5cm患者,≥5cm患者的上皮型CTCs略低于5cm患者,但以上二组之间的差异无统计学意义(P0.05);Ⅳ期患者CTCs检测率、总CTCs、EMT型及间质型CTCs平均值均高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者,差异有统计学意义(P0.05),Ⅳ期患者的上皮型CTCs亦高于另外三组患者但差异无统计学意义(P0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期之间的差异无统计学意义(P0.05);对未出现淋巴结及远处转移的Ⅰ、Ⅱ期患者CTCs进行比较,分析T分期与CTCs的关系,Ⅰ期的CTC检出率及CTC平均值均略低于Ⅱ期患者,但差异无统计学意义(P0.05);对Ⅱ期高危患者进行比较,高危患者组总CTCs平均检测值高于低危组,差异有统计学意义(P0.05),高危组的EMT型CTCs及间质型CTCs的平均值均高于低危组、高危组的上皮型CTCs平均值低于低危组,但以上数值差异无统计学意义(P0.05);Ⅲ期患者中,淋巴结转移数3个患者组总平均CTCs值、上皮型、EMT型及间质型CTCs均高于淋巴结转移数≤3个患者组,但只有间质型CTCs数值差异有统计学意义(P0.05);术前术后比较,除ⅣV期患者术后CTC检测率仍为100%外,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期结直肠癌患者行根治术后CTC检测率及各型数值均明显下降;相关分析显示,CTC总数与间质型CTC均与TNM临床分期相关(P值均0.05),肿瘤分期越晚,CTC总数及间质型CTC数目越多,而上皮型CTC与临床分期未观察到明显相关性;CTCs总数、上皮型及间质型均与CEA值呈正相关(P值均0.05),均与Ca19-9及肿瘤最大径无明显相关,只有EMT型及间质型CTCs与淋巴结转移数目呈正相关(P0.05)。结论循环肿瘤细胞(尤其是间质型CTC)与结直肠癌患者的临床分期、肿瘤部位、高危因素、以及转移密切相关;肿瘤细胞的上皮间质转化在结直肠癌的转移中具有重要作用。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.34
【图文】：

检测流程

３）弃去冻存液，加入含有１０％胎牛血清的ＲＰＭ１－１６４０培养液重悬细胞，逡逑并将其移入培养瓶中，在５％Ｃ０２、３７°Ｃ恒温条件下培养，隔天换液。逡逑４）当细胞增殖并铺满培养瓶底约８０％－９０％时，弃去培养液，ＤＰＢＳ液清洗逡逑后加入０．２５％胰酶ｌｍｌ静置ｌｍｉｎ左右，倒置显微镜下观察细胞形态，逡逑当细胞变圆缩小后加入含有１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液重悬细逡逑胞，将细胞按１：２或１：３进行分瓶培养（具体由细胞数量决定）。逡逑２．２对ＣＴＣ进行分离和分型逡逑采用Ｃａｎｐａｔｒｏｌ？二代ＣＴＣ检测技术，首先裂解外周血中的红细胞，采用国逡逑际公认卟ｍ孔径的纳米膜截留ＣＴＣｓ，实现对所有类型ＣＴＣｓ的分离，最大程度逡逑保留肿瘤细胞原始信息，然后结合多重ＲＮＡ原位杂交（ＲＮＡ－１ＳＨ）技术，排除逡逑表达ＣＤ邋４５＋白细胞，对富集ＣＴＣｓ进行特异性基因核酸定位，对ＣＴＣｓ进行精逡逑准分型，包括上皮型ＣＴＣｓ邋（表达ＥｐＣＡＭ，ＣＫ８／１８／１９）、间质型ＣＴＣｓ邋（表达逡逑Ｖｉｍｅｎｔｉｎ、ｔｗｉｓｔ）、ＥＭＴＣＴＣｓ以及肿瘤细胞团块ＣＴＭ邋（如图２）。逡逑

检测情况,检测技术,肿瘤细胞,富集过程

捐献的血液中，依次进行红细胞裂解、过滤、ＲＮＡ－ＩＳＨ后，用荧光显微镜计数逡逑细胞，并重复５次。结果表明，富集过程为线性（Ｒ２邋＝邋０．９９９），平均检测率达逡逑８０％以上（８０％？８９％邋）（如图５，表３邋）。逡逑２１逡逑

【参考文献】