Gli1与EMT相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

发布时间：2020-06-17 07:45

【摘要】：【研究目的】探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Gli1)及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白Snail、E-cadherin及N-cadherin在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及临床意义,研究Hedgehoog信号通路调控非小细胞肺癌侵袭、转移的分子机制,为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供新的靶点。【研究方法】1.采用免疫组织化学法检测67例非小细胞肺癌组织及配对正常肺组织中Gli1、Snail、E-cadherin及N-cadherin蛋白的表达情况,分析其与患者临床分期、病理类型、淋巴转移和分化程度等临床病理特征及预后的关系。2.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定Gli1、Snail、E-cadherin及N-cadherin基因在20例非小细胞肺癌及其对应癌旁正常肺组织中mRNA的表达情况。3.根据Gli1在NSCLC细胞系A549和H1299中的表达水平,将Gli1表达质粒转染至NSCLC细胞系A549和H1299中,使Gli1低表达的A549外源性过表达,Gli1高表达的H1299外源性降表达,利用Western blot检测Gli1的转染效果。4.利用细胞划痕实验检测Gli1转染后A549和H1299细胞迁移运动能力的变化情况,通过Transwell侵袭实验检测Gli1转染后A549和H1299细胞侵袭能力的变化情况。5.利用Western blot实验检测Gli1转染后A549和H1299细胞中EMT相关蛋白Snail、E-cadherin和N-cadherin的表达变化情况。【研究结果】1.Gli1、Snail、E-cadherin及N-cadherin在NSCLC组织中的阳性表达率分别为61.2%(41/67)、50.8%(34/67)、56.7%(38/67)、53.7%(36/67),在正常肺组织中的阳性表达率为14.9%(10/67)、8.9%(6/67)、98.5%(66/67)、5.9%(4/67),Gli1、Snail及N-cadherin在非小细胞肺癌中的表达高于正常肺组织,E-cadherin在正常肺组织中的表达高于NSCLC,表达差异有统计学意义(P0.05)。2.患者癌组织中Gli1高表达与淋巴结转移、分化程度和临床分期密切相关(P0.05),与性别、年龄、肿物大小和病理分型无相关性;Gli1的表达与E-cadherin的表达呈负相关(r=-0.325,P0.05),与Snail、N-cadherin的表达呈正相关(r=0.379、r=0.490,P0.05)。3.RT-PCR结果显示,Gli1、Snail和N-cadherin在NSCLC中mRNA的表达量为(0.933±0.115vs0.656±0.014vs0.255±0.078),高于正常余肺组织(0.510±0.208 vs 0.086±0.362 vs 0.033±0.043,P0.05),E-cadherin在正常肺组织中mRNA的表达量为(0.811±0.180)高于癌组织(0.461±0.087)的表达量,(P0.05)。4.Gli1、Snail和N-cadherin高表达的患者表现出更差的预后和更低的生存率(P0.05),E-cadherin阴性组的患者较阳性组患者显示出更差的预后和更低的生存率,差异有统计学意义(P0.05)),Cox比例风险回归模型分析结果显示,E-cadherin阴性、淋巴结转移、临床分期、分化程度是影响NSCLC患者预后的独立危险因素。5.Western blot实验结果显示经慢病毒质粒转染并药筛得到稳定的Gli1外源性降表达的H1299和Gli1外源性过表达的A549细胞。6.细胞划痕实验结果显示Gli1降表达的H1299细胞迁移运动能力显著降低,而Gli1过表达的A549细胞迁移运动能力明显提高。Transwell侵袭实验显示Gli1降表达的H1299细胞侵袭能力显著降低,而Gli1过表达的A549细胞侵袭能力明显提高。7.Western blot实验结果显示Gli1降表达的H1299细胞EMT相关蛋白Snail和N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高,而Gli1过表达的A549细胞EMT相关蛋白Snail和N-cadherin表达升高,E-cadherin表达降低。【研究结论】1.E-cadherin在正常肺组织中的表达高于非小细胞肺癌组织,Gli1、Snail和N-cadherin在NSCLC中的表达高于正常肺组织,且Gli1的表达与Snail、N-cadherin的表达呈正相关,与E-cadherin的表达呈负相关,表明非小细胞肺癌中EMT的发生与Hedgehog通路的异常激活有关。2.不同分化程度、淋巴结转移与否和临床分期间Gli1及E-cadherin表达强度有差异,分化程度和临床分期越高,Gli1的表达则越高,E-cadherin的表达越低,有淋巴结转移的患者Gli1的表达高于未发生淋巴结转移的患者,E-cadherin的表达偏低。Snail、N-cadherin的表达与淋巴结转移与否和临床分期有关。3.Gli1可促进NSCLC细胞的迁移和侵袭,Gli1可能是通过调节Snail的表达调节E-cadherin和N-cadherin的表达进而促进NSCLC细胞EMT的进程。4.在非小细胞肺癌中,Hh信号通路的异常活化与EMT的存在密切相关,Gli1与EMT相关蛋白的表达对判断非小细胞肺癌患者的临床特征及预后有一定提示作用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
【图文】：

病理组织学,组织类型,肺鳞癌

天津医科大学硕士学位论文一、Gli1 与 EMT 相关蛋白在 NSCLC 组织中的表达及临床意义1.2 结果1.2.1 NSCLC 中肺腺癌及肺鳞癌分化程度的判读腺癌和鳞癌是 NSCLC 中最常见的两种组织类型,参照 2015 版 WHO 肺癌组织学分类的标准，本研究中对肺腺癌的分化程度的判读标准为：组织类型以附壁样腺癌为主的为高分化腺癌；组织类型腺泡状和乳头状腺癌为主的为中分化腺癌；组织类型以实性腺癌和微乳头腺癌为主的为低分化腺癌；对肺鳞癌的判读标准为：高分化肺鳞癌癌巢中多有角化珠形；中分化肺鳞癌中有角化现象但是不形成角化珠；低分化肺鳞癌细胞异型性明显，且无角化珠（图 1.2.1）。

免疫组织化学染色,临床分期,无相关,淋巴结转移

13A. Gli-1; B. Snail; C. E-cadherin; D. N-cadherin图 1.2.2 免疫组织化学染色检测非小细胞肺癌中 Gli-1,Snail,E-cadherin 和N-cadherin 的表达（SP×400）1.2.3 Gli1 及 EMT 相关蛋白的表达与 NSCLC 患者临床病理特征的关系67 例 NSCLC 组织进行免疫组织化学染色分析，发现癌组织中 Gli1 及E-cadherin 的表达与淋巴结转移、分化程度和临床分期密切相关（P<0.05），与性别、年龄、肿物大小和病理分型无相关性；Snail 及 N-cadherin 的表达与淋巴结转移和临床分期相关（P<0.05），与性别、年龄、肿物大小、分化程度和病理分型无相关性（表 1.2.3）；Spearman 等级相关分析显示 Gli1 的表达与 E-cadherin的表达呈负相关（r=-0.325,P<0.05）,与 Snail、N-cadherin 的表达呈正相关（ r=0.379,r=0.490,P<0.05 ）； Snail 与 E-cadherin 的表达呈负相关（r=-0.318,P<0.05）。

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