香烟烟雾对肿瘤微环境内中性粒细胞的生物学功能影响的体外研究

发布时间：2020-06-17 19:44

【摘要】：目的:本研究的目的是研究香烟烟雾对肿瘤微环境内中性粒细胞的生物学功能影响。方法:从健康人血提取出嗜中性粒细胞,制备肿瘤条件培养基,制备香烟烟雾滤液,CCK-8法确定安全CSE实验浓度,实验以单纯的中性粒细胞为空白对照组、以肿瘤上清液诱导的中性粒细胞为阴性对照组,加入CSE与肿瘤上清液诱导的中性粒细胞为实验组,共培养3h和24h后评估嗜中性粒细胞的生物学功能的变化包括细胞活力,ROS强度,黏附能力和蛋白表达。结果:1.3h,24h中性粒细胞的活性表现出相同的趋势,即不同浓度CSE作用于中性粒细胞,伴随着CSE浓度的上升,中性粒细胞的相对存活率呈现下降趋势。2.CSE浓度较低时,对人膀胱癌T24细胞的增殖起促进作用(p0.05);而用高浓度CSE与人膀胱癌T24细胞共培养24小时后,细胞存活率明显下降(p0.01)。3.用CSE孵育中性粒细胞可以增强嗜中性粒细胞的存活力,并且高于单独培养或与肿瘤上清液共培养的嗜中性粒细胞中观察到的存活力。4.加入CSE使中性粒细胞黏附人脐静脉内皮HUVEC细胞的能力显著下降。5.CSE显著降低肿瘤条件培养基诱导的嗜中性粒细胞产生的活性氧物质(ROS)水平。6.CSE加入肿瘤条件培养基共同孵育后,嗜中性粒细胞出现BV8蛋白表达上调,TNF-α、ICAM-1蛋白表达下调,差异有统计学意义。结论:香烟烟雾提取物可以影响肿瘤微环境中的中性粒细胞的生物学功能,使其活力增强、黏附减弱、ROS降低并表达N2相关蛋白,香烟烟雾提取物可以诱导中性粒细胞N2极化。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14
【图文】：

图 1.中性粒细胞吉姆萨染液染色图片（放大 1000 倍）为了明确从人血中分离出的细胞种类，我们将健康人外周血中提取出的细胞使用吉姆萨试剂染色。吉姆萨染液由天青，伊红组成，可将嗜酸性颗粒染成粉红色，将嗜碱性颗粒染成蓝紫色，将中性颗粒染成淡紫色。如图 1 所示，我们可在油镜下看到，提取出来的细胞呈圆形，细胞核呈杆状或 2～5 分叶状，叶与叶之间有细丝相连。其特征符合标准的中性粒细胞结构：（1）细胞圆形、椭圆形或不定形，结构完整，胞膜和核膜薄而完整;（2）细胞质内有均匀分布的颗粒;（3）分叶正常（2～5 叶）。

图 2.不同 CSE 浓度对中性粒细胞活力的影响* p<0.05，** p<0.01,***p<0.001如图所示：两个时间段中性粒细胞的活性表现出相同的趋势，及不同浓度CSE 作用于中性粒细胞伴随着 CSE 浓度的上升，中性粒细胞的相对存活率呈现下降趋势。相较于无 CSE 组，CSE2.5%组、CSE5%组变化幅度不明显，并无统计学差异，而 CSE 10%组、CSE 20%组及 CSE 40%组对中性粒细胞的活力影响极大，与对照组相比，差异具有统计学意义（p<0.05）。1.2.3 CSE 对 T24 细胞株的细胞毒性及增殖的影响

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本文编号：2718070