口腔鳞状细胞癌血清肿瘤标志物AC007271.3的初步功能研究

发布时间：2020-06-21 03:05

【摘要】：目的筛选出口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的血清肿瘤标志物,并在OSCC中对筛选出的lncRNA-AC007271.3进行初步功能研究。材料与方法1.采用 lncRNA(long non-coding RNA,lncRNA)芯片,筛选出 OSCC 及癌旁对照口腔黏膜组织中差异性表达的lncRNAs,并行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,qPCR)检测验证芯片结果。2.检测分析OSCC患者组织和对应血样,以及OSCC细胞中lncRNAs的表达情况,进一步筛选出OSCC血清中特异性表达的lncRNA(AC007271.3)。3.分别以qPCR及酶联免疫吸附法(ELISA)单独及联合检测80例OSCC患者及70例健康成人血清中AC007271.3和鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCCA)、恶性肿瘤特异性生长因子(tumor supplied group of factors,TSGF)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)和程序性细胞死亡蛋白(programmed death-ligand 1,PD-L1)的表达水平,结合OSCC患者的临床参数,分析其临床意义。同时,应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)和决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)评估单独或联合检测血清中各标志物的诊断价值;采用Kaplan-Meier生存曲线评估OSCC患者总体生存情况。4.以荧光原位杂交技术明确AC007271.3在OSCC细胞中的定位,进一步探讨AC007271.3的功能;敲减及过表达AC007271.3后,采用CCK-8、细胞克隆形成、划痕损伤修复、transwell基质胶侵袭及细胞凋亡实验,初步探讨AC007271.3对OSCC细胞生物学功能的影响。5.采用免疫印迹及免疫荧光检测并探讨AC007271.3通过Wnt/β-catenin信号通路在OSCC发生发展过程中的重要作用。结果1.基因芯片检测筛选出691条差异性表达的lncRNAs和816条差异性表达的mRNAs(433 条 lncRNAs 表达上调,258 条 lncRNAs 表达下调;342 条 mRNAs表达上调,474条mRNAs表达下调)。通过GO和pathway等生物信息学分析及qPCR实验,进一步筛选出在OSCC及癌旁对照口腔黏膜组织中存在显著差异的 4 条 lncRNAs(AC007271.3,AC007182.6,LOC283481 和RP11-893F2.9)(n=30,P0.05)。2.AC007271.3在OSCC患者组织及对应血清中的表达存在相关性(r=0.639,P0.001),在OSCC细胞系及对应细胞外培养液中均上调,且术后患者血清中AC007271.3水平明显下降(P=0.002)。OSCC患者与健康成人血清中AC007271.3呈明显差异性表达(n=80 andn=70,P0.0001),其表达水平与患者肿瘤临床分期、分化程度和淋巴结转移密切相关。3.将AC007271.3和SCCA进行联合检测,其诊断价值(AUC = 0.902,P0.001)明显优于二者单独检测,尤其在OSCC的早期阶段;OSCC患者血清中AC007271.3及SCCA高表达,提示其预后相对较差。此外,血清AC007271.3,SCCA和TSGF联合检测时的敏感度(77.6%,55%,63.3%)和特异性(84.5%,93.3%,66.7%)均具有优势。4.AC007271.3在OSCC细胞质及细胞核中均有表达,体外实验结果显示,敲减AC007271.3,可以抑制OSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡;而过表达AC007271.3,可以促进OSCC细胞增殖、迁移和侵袭能力。5.AC007271.3 可以通过上调 β-catenin及其下游分子 CyclinD1、c-myc 及 Bcl-2,激活Wnt/β-catenin信号通路。结论AC007271.3是OSCC早期诊断的肿瘤标志物,可作为OSCC独立的预后因子。AC007271.3,SCCA和TSGF联合检测可用于OSCC的诊断。AC007271.3能促进OSCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,影响细胞凋亡,并且可通过Wnt/β-catenin信号通路在OSCC的发生发展过程中起作用。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.8
【图文】：

分布情况,火山,散点图,分布情况

口腔黏膜组织（图中以Ｎ表示）中差异性表达的基因，以平均表达水平为界，逡逑分别以红色和绿色模块表示上调及下调的基因。结果显示，ＯＳＣＣ与癌旁对照口逡逑腔黏膜组织中ｌｎｃＲＮＡｓ及ｍＲＮＡｓ的表达谱均存在明显差异（图２－１）。散点图逡逑和火山图进一步呈现出上调及下调基因中ＦＣ大于２的ｌｎｃＲＮＡｓ邋（图２－２）。逡逑Ａ逦Ｒ逡逑Ｃｏｌｏｒ邋Ｋｅｙ逦逦逦邋ｗ逦Ｃｏｌｏｒ邋Ｋｅｙ逦逦１逡逑５邋６邋７邋８邋＆逦逦逦１逦ｊ逦６逦６逦１０逦￣邋…＂逦］逦ｆ逦N逦＇：逡逑ＶａＪｙｅ逦Ｊ逦：逦ｊ逦＇逦１逦ＶａＫｉｅ逦［逦Ｌ；逦｜逦｜逦＇逦ｊ逡逑二，二二ｎ：二ＬＴＪ！逦ＳＩＨＩＭＨＩＩＭＨＨＩＨＨＢ逡逑、…逦逦邋逦＾逦“逦洲逦￣逡逑ＴＭｉｉｒ；Ｍｉｉ．ｉｉｒｕ＇ｉ！ｉＭＭＭｌ＇ｉｌ．ｉ＜Ｖ＇ｉＭ逦：二逦逦逦逦逡逑二二二＿二３！！．＿．：：：二Ｔ：：２ＳＳＳＳＳＳＳＨＳ逡逑￣￣逡逑字：：Ｓｇ￡ＳＥＳＳ＾＾＾＾ＷＷＷＷＷＷＭＷＷｆｆｌＷＳ？ｗ邋栜嘛逦！：．二■Ｌ－ｎ，；ｌ！＾！：：：Ｅｒ！＾ｉＥｉｒｏｇ＾ＳｇｇＨｔ；＾ｇ逡逑逦？邋—－－－■邋■■，．．．逦逦：Ｈ上逡逑逦￣邋？邋－－ｙ．＞ＫｇＫ：ｉ；逦逦一．一—－一逦＇邋：．邋ｖ＾＇．逡逑供、ｇｇ－抑屖■…””叫．１－＊＊＊…＾々－々，“－－．一如＇＾邋“、二—一邋—邋．．：，．．：．．．：．■邋＾：：ｓ邋．邋＇．－邋－．；：逦一一邋－．＇Ｗ逡逑八？逦ｖ－？－ｓ—＾邋逦逦逦逦邋逦邋１

分类组,靶基因,功能,细胞核

根据Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ邋Ｅｘａｃｔ邋Ｔｅｓｔ中Ｐ值的大小，判断１沉咖八３对应的靶基因功能逡逑的显著性，从而推断ＩｎｃＲＮＡｓ可能具有的功能。结果显示，这些差异性表达的逡逑ＩｎｃＲＮＡｓ在细胞核及胞外区域中均有分布，主要位于胞外区域（图２－３）。逡逑Ａ逦ＧＯ邋Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋Ｃｏｍｐｏｍｅｎｔ邋Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ逡逑；Ｃ邋３0邋ｊ邋ｃｒｔ0（ｒＫｆＳＱｔｔ＾＼邋——ｒ邋邋邋逡逑ｄ邋ｒ逦｜邋＜ｒ－＾ＯＣ＞Ｃ－？Ｘ－逦．VZ邋ｊ各：Ｖ！－歐馨逡逑４逦：逡逑逦邋邋＿逦汉邋８０逦．ｘｏａｒｈ＾ｋｊｒｒ＾ｎｊ逡逑｛邋”邋ｊｗｖｆｒ＾ｉｉＮ＾Ｔ＾ＸｊｒｘＳｖＵ邋＜[缈В危骸邋邋澹А保撸摺哓哓保浚ⅲ掊义希洛危牵襄澹茫澹欤欤酰欤幔蝈澹茫铮恚穑铮睿澹睿翦澹茫欤幔螅螅椋妫椋悖幔簦椋铮铄义希唬颍叔澹澹澹卞危觯诲五五邋五澹螅五蜸逡逑？￣￣——￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣逦／邋邋逦ｊ［邋１３６逡逑￣逦一．—一…．．．逡逑（Ｓ４逦0？0？＞＊＞；逦ｒ＇邋＇；ｔ逦：人／＇ｖ逡逑Ｉ靡逡逑ｉｔ邋ｉ３ａ邋ｔｉｄａｓｓＴ＾ｎｗｔｉｉｖＫ＾逡逑．丨口逡逑逦：，／邋ｊ[雫枈1~栧义希坼澹拢叔澹荩迹颍兀椋ǎ粒迹蓿担煎危叔濉鲥危蝈危у澹蓿穑椋危ВВ剩义襄五澹悖颍纾幔颍鳎簦邋五五澹殄危义希帷Аⅲㄥ澹欤簦浚板澹颍簦ǎ浚悖浚浚蓿海常殄澹恚铄义希洌Аⅲ矗省㈠五五五五濉觯ⅲ㈠义希卞澹ⅲ郑义蟇邋ｆ逦逦逦逦逦逦，逡逑＇逦ｉｉｘｔｊ逡逑；Ｃ邋１０

【参考文献】