5,7-二甲氧基黄酮抗肝癌的机制研究

发布时间：2020-06-26 03:18

【摘要】：第一部分5,7-DMF抗肝癌细胞系HepG2活性及机制的研究目的:探讨5,7-二甲氧基黄酮抗肝癌细胞系HepG2活性的可能机制方法:肝癌细胞系HepG2接种于6孔板上,接种细胞密度为每孔2×l05个细胞,分为介质处理组(培养基中1%DMSO),5,7-二甲氧基黄酮处理组1OμM组,5,7-二甲氧基黄酮处理组25μM组,5,7-二甲氧基黄酮处理组50μM组,各组分为0h,24h,48h和72h四个时间点亚组。将肝癌细胞系HepG2接种在相应浓度的5,7-二甲氧基黄酮的培养基进行培养,光镜下观察HepG2细胞形态,MTT比色皿法测定不同浓度5,7-二甲氧基黄酮处理的HepG2在相应时间的细胞活性水平;采用浓度分别为0、10、25和50μM的5,7-二甲氧基黄酮培养24h,利用流式细胞仪测定HepG2细胞周期的分布;采用浓度为25μM的5,7-二甲氧基黄酮培养肝癌细胞系HepG2,分别在0、6、12、24、48和72h使用DCFH-DA方法测定细胞内ROS的水平及使用DiOC6方法测定细胞中Δψm的水平;采用浓度分别为0、10、25和50μM的5,7-二甲氧基黄酮培养48h,tunnel法检测细胞凋亡情况并且在光镜下观察细胞集落形成情况。结果:5,7-二甲氧基黄酮处理HepG2细胞后,细胞数量减少,细胞形态出现明显的改变;随着5,7-二甲氧基黄酮处理时间的延长及浓度的增加,HepG2的活力下降的更加明显,IC50为25μM;G1期细胞群随着5,7-二甲氧基黄酮的浓度增加而增加;细胞内ROS的水平随着时间的延长逐渐升高,水平随着时间的延长而逐渐降低;细胞凋亡水平随着5,7-二甲氧基黄酮的浓度升高而增加,细胞集落的水平随着浓度的增加而相应的减少。结论:5,7-二甲氧基黄酮可以降低肝细胞癌系HepG2的活力,半抑制浓度IC50为25μM。5,7-DMF抗HepG2活力的作用可能是通过阻滞细胞周期;增加了细胞内ROS的水平,降低Δψm的水平;减少细胞集落的形成,最终导致细胞凋亡的增加。第二部分5,7-DMF对裸鼠体内肝癌细胞系HepG2成瘤影响的研究目的:探讨5,7-二甲氧基黄酮抑制HepG2在裸鼠体内成瘤的作用研究。方法:BALB/c裸鼠36只,接种肝癌细胞系HepG2术后第1天开始给药,按给药方法及剂量分为6组,(1)生理盐水组(NS):NS10μ1/只,腹腔注射;(2)5,7-DMF(10μM)组(D1):腹腔注射 5,7-DMF,10μ1/只;(3)5,7-DMF(25μM)组(D2):腹腔注射 5,7-DMF,10μ1/只;(4)5,7-DMF(50μM)组(D3):腹腔注射5,7-DMF,10μ1/只;(5)5-FU 组(FU):腹腔注射 5-FU20mg/kg/只;(6)5,7-DMF(50μM)+5-FU组(D3+FU):腹腔注射5-FU20mg/kg+5,7-DMF10μ1/只。以上各组均每3天1次连续5次分别于接种前、接种后第2、5、8、11、14、17天观察各组BALB/c裸鼠肿瘤生长情况及小鼠的一般状况,电子天平测量小鼠的重量。皮下接种肝癌细胞系HepG2细胞后第5、8、11、14、17天观察记录肿瘤的生长情况,测量长短径,用游标卡尺测量皮下接种肿瘤的长短径,分析体积的变化,结果以均数加减标准差表示(x±s){肿瘤体积计算公式:V=(A×B2)/2,A为长径,B为短径}。接种肿瘤细胞17天后,引颈法处死全部BALB/c裸鼠,将裸鼠皮下肿瘤完整剥离,拍照、进行比较,行切片HE染色,显微镜下观察细胞形态。结果:在体重方面,NS、D1、D2及D3组裸鼠的体重无明显差异;D3+FU组同FU组裸鼠的体重无明显差异。各组荷瘤裸鼠皮下肿瘤体积在实验结束较接种第5天比较均有增大,以NS组最明显,D1组次之,D3+FU组增加最小。结论:本研究发现,说明5,7-DMF对裸鼠无明显的不良反应,且5,7-DMF未增加5-FU的不良反应;5,7-DMF可抑制HepG2在裸鼠体内成瘤的作用,且呈浓度相关性,浓度越高抑制成瘤的作用越明显,5,7-DMF联合5-FU可以增强抑制成瘤的能力。
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

细胞形态,肝癌细胞系,活力

图１肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞形态（Ｘ１００倍）逡逑图：对照组ＨｅｐＧ２细胞形态；Ｂ图：１邋ＯｐＭ组的ＨｅｐＧ２组的ＨｅｐＧ２细胞形态；Ｄ图：５０ｐＭ组的ＨｅｐＧ２细胞形态逡逑活力的变化逡逑

细胞活力,肝癌细胞系,浓度,细胞周期

随着５，７－ＤＭＦ的浓度的增加，细胞活力的抑制越明显；在相同浓度逡逑的５，７－ＤＭＦ作用下，随着干预处理时间的延长，细胞活力的下降更加明显，逡逑（见图２）。逡逑１００逡逑ｇ邋７０逡逑＾邋６０邋■逡逑Ｉ邋５０－邋＿２４ｈ逡逑Ｉ邋４０－逡逑５邋２０邋：邋—７２邋ｈ逡逑１０邋－逡逑Ｏ邋逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逦逡逑０逦１０逦２５逦５０逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（ｕＭ）逡逑图２肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞活力逡逑注：采用浓度分别为Ｋ＾Ｍ、２５＾ｉＭ和５０｜ＪＶ４的５，７－ＤＭＦ分别培养２４ｈ、４８ｈ及７２ｈ，逡逑ＨｅｐＧ２细胞活性情况。逡逑３．３细胞周期化逡逑对比不同浓度的５，７－ＤＭＦ处理组细胞周期的情况，同ＯｐＭ的５，７－ＤＭＦ组逡逑９逡逑

【参考文献】