miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究

发布时间：2020-06-26 16:40

【摘要】：miRNAs是长度为22nt的内源性非编码RNA,在体内作为信号分子参与调节多种细胞活动。miRNAs的异常表达常与疾病发生相关,并且在癌症的诊断、治疗和预后方面具有临床应用潜力。本文对mi R-342-5p在非小细胞肺癌(non-small-cell carcinoma,NSCLC)细胞A549和H460中的作用及其调节机制进行了研究。1.miR-342-5p在NSCLC A549和H460中的表达及作用为探究miR-342-5p在A549和H460中的作用,本研究首先利用实时定量PCR(qPCR)检测miR-342-5p在肺癌细胞A549和H460中的表达,结果显示miR-342-5p在A549和H460中的表达低于正常的肺上皮细胞HBE。其后,将miR-342-5p mimics分别转染A549和H460细胞,通过提高miR-342-5p在细胞中的表达检测其对肺癌细胞恶性表型的影响。结果显示,miR-342-5p的表达升高后显著抑制了A549和H460的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力。为进一步验证这一结果,将构建的过表达miR-342-5p的慢病毒载体感染A549和H460细胞,并利用嘌呤霉素筛选出稳定过表达细胞。细胞恶性表型检测结果表明,稳定过表达miR-342-5p同样显著抑制了A549和H460细胞的增殖、迁移和克隆形成能力。最后,将稳定过表达miR-342-5p的H460细胞皮下注射到裸鼠体内,结果显示,与对照组相比mi R-342-5p抑制了H460的体内成瘤率,肿瘤的体积和重量也减少。上述结果表明miR-342-5p在肺癌细胞中具有抑癌基因的作用。2.miR-342-5p靶基因检测及其相互作用关系并验证为了探讨miR-342-5p影响A549和H460细胞恶性表型的作用机制,首先利用TargetScan7等软件预测了miR-342-5p的靶基因,并用qPCR检测了各候选靶基因在A549和H460中的表达,在检测的候选靶基因中,ELP3、FURIN和PPARGC1A等基因在两种肺癌细胞中的表达都显著高于HBE细胞,而在过表达miR-342-5p的两种肺癌细胞中这3个基因的表达量都显著降低。之后用荧光素酶报告实验(Luciferase assay)证明PPARGC1A是miR-342-5p的一个靶基因。为进一步验证miR-342-5p和靶基因PPARGC1A之间的相互作用,本研究合成了PPARGC1A基因的干扰片段,转染细胞后降低了PPARGC1A基因的表达量。细胞恶性表型检测表明,A549和H460细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆形成能力都受到了显著的抑制。综上所述,miR-342-5p在肺癌细胞A549和H460中低表达,miR-342-5p过表达后,可降低A549和H460细胞的增殖、迁移、侵袭及克隆形成的能力,并抑制体内成瘤。荧光素酶报告实验证明PPARGC1A是mi R-342-5p的一个靶基因,降低PPARGC1A的表达量能显著抑制细胞恶性表型。因此,miR-342-5p抑癌的作用可能是通过直接靶向PPARGC1A基因起作用。
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R734.2
【图文】：

细胞系,内蒙古大学,染色试验,非小细胞肺癌

内蒙古大学硕士学位论文挑选 3 个样本作石蜡切片 HE 染色试验，剩余样数±标准差表示，组间比较用 t 检验。P<0.05 有显实验结果肺上皮细胞和非小细胞肺癌细胞系中的表达R检测非小细胞肺癌A549和H460中miR-342-5p H460 细胞中的表达量显著低于正常的肺上皮细

转染,过表达,对正

-342-5p mimics 后 HBE 细胞中 miR-342-5p 的表达（***ression of miR-342-5p in HBE Cells with miR-342-5p mimp mimics 对肺上皮细胞 HBE 表型的影响5p mimics 后对肺上皮细胞 HBE 的增殖能力没有2-5p对正常的肺上皮细胞HBE的影响，用CCK-8 HBE 增殖能力的变化。结果表明，过表达 miR-342化。

【参考文献】