肝癌细胞侵袭转移相关的蛋白质组和泛素化蛋白质组研究

发布时间：2020-06-28 18:37

【摘要】：肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一,其死亡率在各种恶性肿瘤中高居第二位。虽然目前肝细胞癌的治疗水平正不断提高,但肝癌患者预后差的状况并未得到明显改善。肝癌5年转移复发率仍然高达57.2%,是影响肝癌远期疗效的瓶颈。因此,寻找新的高特异性和高灵敏度的肝细胞癌预后生物标志物是目前进一步提高肝癌治疗效果、降低肝癌死亡率、提高肝癌远期生存率的关键。本课题运用无标记定量蛋白质组学技术(Label-free)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析 Hep3B、MHCC97L、MHCC97H 以及HCCLM3四组具有不同侵袭转移潜能的肝癌细胞系的蛋白质组和泛素化蛋白质组,筛选与肝癌侵袭转移相关的差异表达蛋白及泛素化修饰位点,以期寻找可以预测肝细胞癌复发转移潜在的生物标志物,并初步探讨其参与肝细胞癌复发转移的分子机制。定量蛋白质组学研究中,以侵袭转移潜能最低的Hep3B细胞系为对照,设定差异倍数2.0为上调蛋白,差异倍数0.5为下调蛋白。在四组肝癌细胞系中共筛选到218个差异表达蛋白,其中上调蛋白有43个,下调蛋白有175个。对差异表达蛋白进行GO分析发现差异表达蛋白主要参与细胞粘附生物过程,分子功能涉及与细胞粘附相关的钙黏蛋白结合活性和Ran鸟苷三磷酸酶活性;KEGG信号通路分析发现差异表达蛋白主要涉及碳代谢信号通路;差异表达蛋白的互作网络主要以HSPA9为中心。泛素化修饰定量蛋白质组学分析对四组细胞株进行双甘氨酸(di-Gly)抗体亲和纯化泛素化肽段,比较不同侵袭转移潜能的肝癌细胞系的泛素化修饰蛋白及修饰位点的差异。以侵袭转移潜能最低的Hep3B细胞系为对照,设定差异倍数2.0为上调,差异倍数0.5为下调,挑选泛素化差异表达蛋白及位点。在四组肝癌细胞系中共筛选到235个差异表达的泛素化蛋白和1919个泛素化修饰位点。其中上调泛素化蛋白有70个,下调泛素化蛋白有165个。GO分析发现差异的泛素化蛋白主要参与细胞粘附和乳酸代谢生物过程,主要涉及与细胞粘附相关的钙黏蛋白结合活性分子功能;KEGG信号通路分析发现泛素化差异表达蛋白主要涉及糖酵解和糖质新生信号通路;蛋白互作网络主要以CTNND1为中心。另外,在表达差异的泛素化肽段中推测到最可能的基序(motif)是:IALAEEAKAAGAPKE。主要的泛素化位点为:DESTK19;FLNBK1955。本文定量分析了不同侵袭转移潜能肝癌细胞株的蛋白质组以及泛素化修饰组,深入探讨了肝癌细胞的侵袭转移在蛋白质组和泛素化修饰组层面的主要特征,并筛选了 DEST和FLNB2个潜在的可能作为肝癌预后的生物标志物,为后续肝癌转移复发的研究提供了理论基础。
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

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对ＭａｘＱｕａｎｔ邋（ｖｅｒｓｉｏｎ邋４．２）软件在四组肝癌细胞中定量到的２９５３个蛋白质所逡逑包含的肽段数目进行数据统计和蛋白质分子量分布统计。结果表明，在定量到的逡逑２９５３个蛋白质中，全部蛋白质拥有高度特异性唯一的肽段（图１－４）。这些蛋白质逡逑的分子量范围是０－４０００邋ｋＤａ，说明这些蛋白质分子量分布十分广泛且呈不均匀分逡逑布（图１－５）。逡逑６００－．逡逑１｜逡逑４００邋Ｊｇ邋１逡逑Ｅ邋■邋■逡逑0逡逑ｕ邋１邋＾邋■逡逑．Ｅ逡逑■邋■邋■邋＿逡逑２逡逑Ｉ邋Ｉ邋Ｉ邋画？逡逑■邋■邋Ｉ邋ＩＩ邋■■■＿逡逑＿＿丨丨雾ＩＩ逦Ｈ逡逑ｑ逦＾邋＾邋■邋ｒ逦：邋ｊ：邋－邋＾邋＾逦ｔＳＩ邋ｒｉ邋ｒｉ邋ｎｒｉ邋ｆＴｌ邋＼邋Ａ邋ｍｍｎ邋ｒｒ＊邋ｒｊ％逦Ｉ邋ｌ逡逑Ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｐｅｐｔｉｄｅ逡逑图１－４邋ＭａｘＱｕａｎｔ定量蛋白质肽段数目统计图逡逑１６逡逑

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差异蛋白列表见附表一。逡逑用ＨｅｍＩ软件对这２１８个差异表达的蛋白质进行树状图层次聚类并绘制热图。逡逑２１８个差异表达蛋白聚类结果见图１－６。定量蛋白质组学在四组肝癌细胞系中共逡逑筛选到２１８个差异表达的蛋白质，其中上调蛋白质有４３个，下调蛋白质有１７５逡逑个。逡逑１７逡逑

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