HBx转染肝癌细胞促进侵袭转移能力及lncRNA表达谱差异的初步探讨

发布时间：2020-07-04 03:39

【摘要】：目的:本实验以人肝癌细胞株HepG2和Huh7为研究对象,通过瞬时转染HBx基因,来研究HBx对肝癌细胞侵袭转移能力的影响及转染肝癌细胞前后lncRNA的差异表达谱,为合并HBV感染的肝癌患者的诊断与治疗提供新的思路。方法:将体外培养的两个肝癌细胞株(HepG2和Huh7)各分成3组:空白组、pcDNA3.1转染组和pc DNA3.1-HBx转染组,通过RT-PCR技术检测两个肝癌细胞株中HBx mRNA的表达;通过Transwell实验检测HBx对肝癌细胞侵袭能力的影响和划痕实验检测HBx对肝癌细胞转移能力的影响,观察转染前后肝癌细胞侵袭转移能力的变化;采用Illumina HiSeq?2000测序仪及DEseq2软件检测分析HBx转染HepG2细胞前后lnc RNA的差异表达谱,寻找变化的lncRNAs,并通过q RT-PCR技术验证HBx转染HepG2细胞前后lncRNA mRNA的表达水平。结果:1.Transwell实验结果显示HepG2和Huh7细胞中pcDNA3.1-HBx转染组的侵袭细胞数明显增加;划痕实验结果显示HepG2和Huh7细胞中pcDNA3.1-HBx转染组的迁移距离明显变长。2.RNA测序结果显示:HBx转染HepG2细胞前后差异表达的mRNA共29个,其中表达上调的有17个,表达下调的有12个;差异表达的lncRNA共10个,其中表达上调的有3个,表达下调的有7个。3.qRT-PCR结果显示:与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-HBx组中lnc RNA ENST00000582866.1的表达水平明显下调,lncRNA ENST00000607259.1和lncRNA ENST00000513358.3的表达水平明显上调。结论:1.转染HBx基因可导致转染后肝癌细胞的侵袭转移能力增强。2.瞬转HBx的肝癌细胞lncRNA表达谱差异分析,mRNA和lncRNA表达差异基因分别为29个、10个,其中表达上调的分别为17个、3个,表达下调的分别为12个、7个。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

HepG2 细胞转染前后 Transwell 实验镜下照片（200×）；B. HTranswell 实验侵袭细胞数直方图uh7 细胞：空白组侵袭细胞数为 60.60±6.35，pcD37，pcDNA3.1-HBx 转染组为 130.60±10.31。pcDNA3.1

AHuh7细胞转染前后Transwell实验镜下照片（200×）；B.Huh7细胞转染前后Transwell实验侵袭细胞数直方图

【参考文献】

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1 Ming Geng;Xuan Xin;Li-Quan Bi;Lu-Ting Zhou;Xiao-Hong Liu;;Molecular mechanism of hepatitis B virus X protein function in hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2015年38期

2 Ting-Ting Yu;Xi-Ming Xu;Yi Hu;Jun-Jian Deng;Wei Ge;Na-Na Han;Mei-Xia Zhang;;Long noncoding RNAs in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2015年23期

3 Mirko Tarocchi;Simone Polvani;Giada Marroncini;Andrea Galli;;Molecular mechanism of hepatitis B virus-induced hepatocarcinogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

4 杨世忠;张爱群;陈耿;张雷达;朱瑾;李晓武;董家鸿;;乙型肝炎病毒X蛋白诱导肝癌细胞上皮-间叶样表型转化的实验观察[J];中华医学杂志;2010年12期

本文编号：2740582