MALAT1在乳腺癌血浆中的表达及其对ER阳性细胞增殖调控机制的研究

发布时间：2020-07-04 07:20

【摘要】：目的:检测乳腺癌患者血浆中长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)的表达变化,并探讨其临床意义。方法:应用实时荧光定量PCR方法评估MALAT1各区域片段在10名健康人血浆中的表达,并检测102例术前、64例术后乳腺癌患者、47例良性乳腺肿瘤患者以及50例健康对照者血浆中内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和MALAT1的表达水平。分析GAPDH的表达与正常人及患者各临床资料的关系,判断其稳定性。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析MALAT1鉴别诊断乳腺癌的效能,并与CA153和CEA作比较。分析术前MALAT1的表达与患者临床病理特征之间的关系以及比较手术前后血浆中MALAT1的表达。结果:GAPDH在女性外周血中表达稳定,不受年龄和病理因素的影响(P0.05),可以用作本研究中血浆lncRNAs检测的内源性参照。血浆MALAT1各片段表达有显著差异(x 2=27.042,P0.001)。乳腺癌组术前血浆MALAT1的相对表达量5.58(2.17～12.34)较良性组 1.08(0.61～2.58)(Z=6.209,P0.001)及健康对照组1.63(0.98～3.51)(Z=4.871,P0.001)显著增高,而良性组与健康对照组之间,差异无统计学意义(Z=-1.675,P=0.094)。Ⅰ-Ⅱ期乳腺癌患者术前血浆MALAT1较良性组异常高表达,差异有统计学意义(Z=5.593,P0.001)。术后血浆MALAT1相对表达与术前相比显著降低(Z=-2.248,P=0.025)。ROC曲线分析结果显示MALAT1、CA153和CEA鉴别乳腺癌患者与健康对照者曲线下面积AUC分别为0.744、0.619和0.553;敏感度分别为54.1%、60.0%、70.0%;特异度分别为86.3%、66.7%、44.1%。乳腺癌患者术前血浆MALAT1的表达与TNM分期(Z=-1.982,P =0.047)、淋巴结转移(Z=-2.186,P =0.029)和病理分化程度(Z=-2.435,P=0.015)相关。结论:MALAT1可能是乳腺癌的潜在新分子标志物。目的:探讨MALAT1参与ER阳性乳腺癌细胞增殖调控的潜在机制。方法:收集南京医科大学附属肿瘤医院自2017年6月至2018年1月ER阳性乳腺癌及癌旁组织标本20例,反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测MALAT1和miR-503-5p的表达。CCK-8及克隆形成实验检测转染小干扰RNA(siRNA)/阴性对照(si-NC),miRNA/阴性对照(miRNA NC)或者毛蕊异黄酮处理后ER阳性乳腺癌细胞MCF7和T47D的增殖能力。采用荧光素酶实验检测miR-503-5p和MALAT1之间是否存在关联。Western blot实验检测毛蕊异黄酮处理MCF7细胞后ERβ蛋白的表达。染色质免疫共沉淀Chip实验检测MCF7细胞中MALAT1基因启动子区域是否存在转录因子ERβ结合位点。结果:MALAT1在ER阳性乳腺癌组织中高表达(P0.05)。敲低MALAT1表达显著抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖(P0.05)。与ER阴性乳腺癌细胞相比,毛蕊异黄酮(calycosin)抑制ER阳性细胞增殖效果更明显(P0.05)。Chip结果表明MALAT1基因启动子区域(-816～-562)存在转录因子ERβ结合位点。毛蕊异黄酮刺激MCF7细胞后显著增加了 ER β与该区域的结合(P0.05)。miR-503-5p在ER阳性乳腺癌组织中低表达(P0.05)。过表达miR-503-5p显著降低了 ER阳性乳腺癌细胞增殖能力(P0.05)。通过生物信息分析及后续的荧光素酶报告实验证实MALAT1可直接绑定miR-503-5p。结论:毛蕊异黄酮可能通过ERβ-MALAT1-miR-503-5p信号通路抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

５．邋５８（２．邋１７？１２．邋３４）较良性组邋１＿邋０８（０．邋６１？２．邋５８）邋（Ｚ＝６．邋２０９，户邋＜０．邋００１）及健康对逡逑照组１．６３邋（０．９８？３．５１）邋（Ｚ＝４．邋８７１，Ｚ３邋＜０．００１）显著增高，而良性组与健康对照组逡逑之间，差异无统计学意义（Ｚ＝－ｌ．邋６７５，户＝０．邋０９４），见图２。Ｉ邋－ＩＩ期乳腺癌患者术前逡逑血浆ＭＡＬＡＴ１较良性组（Ｚ＝５．邋５９３，邋Ｚ３邋＜０．邋００１）和健康对照组（Ｚ＝４．邋１８３，广＜０．邋００１）异逡逑常高表达，较ｍ－ＩＶ期患者低表达（Ｚ＝－ｌ．邋９８２，户印．０４７）。６４例乳腺癌患者术后血逡逑浆ＭＡＬＡＴ１表达２．邋０９（１．邋０８？３．邋５１）较术前３．邋９１邋（１．邋５９？１１．邋２８）显著降低，差异有逡逑统计学意义（Ｚ＝－２．邋２４８，户＝０．邋０２５）。逡逑逦ｒ邋＝０．０９４逦逡逑．＾邋＜０．００１逦．邋＜０．００１邋．逡逑８０－１逦１逡逑多逦７０－逡逑拍逦６０－逦－逡逑懈逦５０－逦、逡逑友逦４０－逦▲▲▲▲逡逑要邋３０－逦▲逦ｙ逡逑Ｔ－逦２０－逦ＡＡ＾ｔ逦▲逡逑３逦＊0－邋—逦————Ｉ逦■逡逑图２血浆ＭＡＬＡＴ１在各组中的表达逡逑２１逡逑

型［ｌｏｇｉｔ0Ｐ）＝－0．邋９１７＋０．邋１５２ＭＡＬＡＴ１＋０．邋０６９ＣＡ１５３－０．邋０１１ＣＥＡ］预测邋ＭＡＬＡＴ１、ＣＡ１５３逡逑和ＣＥＡ联合检测诊断乳腺癌时的ＡＵＣ（０．邋７５４）最高，敏感度和特异度分别为６０．邋０％逡逑和８１．邋４％，见图３和表３。逡逑，ｓ邋ｊＶ邋尸逡逑１／邋ｊ逦—邋ＭＡＬＡＴ１逡逑ｊＪ邋，ｊ－；逦—ＣＡ１５３逡逑ＣＥＡ逡逑—ＭＡＬＡＴ１＋ＣＡ１５３＋ＣＥＡ逡逑参考线逡逑逦ｉ逦ｉ逦逦ｉ逦ｉ逦逡逑０逦Ｏ－邋２逦Ｏ．邋？！逦Ｏ．邋ｅ逦Ｏ邋Ｓ逦１．０逡逑１邋－特异性逡逑图３乳腺癌患者ＭＡＬＡＴ１、ＣＡ１５３和ＣＥＡ单独及联合ＲＯＣ曲线分析逡逑表３邋ＭＡＬＡＴ１、ＣＡ１５３及ＣＥＡ的单独或联合诊断效能逡逑敏感度逦特异度逡逑项目逦ＡＵＣ逦９５％ＣＩ邋临界值逡逑（％）邋（％）逡逑ＭＡＬＡＴ１逦０．７４４逦０．６６２？０．８２５逦１．６９逦５４．邋１逦８６．３逡逑ＣＡ１５３逦０．６１９逦０．５２３？０．７１５逦１０．２３逦６０．０逦６６．７逡逑ＣＥＡ逦０．５５３逦０．４５６？０．６５１逦１．８１逦７０．０逦４４．邋１逡逑ＭＡＬＡＴ１＋ＣＡ１５３＋

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