CXCL2对SMMC-7721肝癌细胞生物学功能的影响研究

发布时间：2020-07-21 23:36

【摘要】：背景与目的:肝癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一,在全国癌症死亡病因中排在第二位;肿瘤的发生发展与其炎症微环境密切相关。随着分子生物学和生物信息学的发展,相同或不同的研究学者发现,肿瘤细胞在与微环境共同进化的过程中可促进肿瘤炎症微环境的形成。研究肿瘤微环境中高表达的促炎因子与炎症-癌症信号通路关系已成为目前肿瘤微环境研究重点。C-X-C结构趋化因子配体2(CXCL2)是一类主要趋化中性粒细胞的趋化因子,与其特异性受体C-X-C结构趋化因子受体2(CXCR2)结合后可促进中性粒细胞的趋化和部分肿瘤细胞的生长和迁移。我们的前期研究在选择性活化的巨噬细胞(M2型)与肝癌细胞共培养体系中验证出了差异分泌蛋白CXCL2,中和共培养体系中的CXCL2后肝癌细胞的迁移和侵袭能力降低,提示了CXCL2可能对肝癌细胞生物学功能产生影响。目前关于CXCL2与肝癌发生发展间关系的报导还比较少,本研究将进一步验证CXCL2过表达在肝癌细胞上会对肝癌细胞的生物学功能产生什么样的影响,为肝癌的早断、寻求新的治疗方案、改善患者预后提供依据。方法:将过表达CXCL2基因的慢病毒载体感染SMMC-7721肝癌细胞,即设为慢病毒感染组;空白对照组为不做任何感染处理的SMMC-7721肝癌细胞。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)分别检测CXCL2基因mRNA和CXCL2蛋白的表达情况;用CCK-8法检测细胞活力来验证细胞的增殖能力;利用Transwell法细胞侵袭实验和细胞划痕实验来评估肝癌细胞的侵袭和迁移能力;运用细胞粘附实验检测细胞粘附力;使用流式细胞仪检测细胞周期。运用SPSS23.0统计软件对实验数据进行统计学分析。结果:稳定过表达CXCL2的SMMC-7721肝癌细胞株构建成功,慢病毒感染组CXCL2基因mRNA和CXCL2蛋白的表达均高于空白对照组;CCK-8法检测细胞增殖能力实验发现,慢病毒感染组细胞增殖相对较多(P0.05);Transwell法细胞侵袭实验发现,慢病毒感染组穿过基质膜的细胞数比空白对照组多且差异具有统计学意义(P0.05);通过细胞划痕实验观察在划痕后0h、8h、24h三个时间点细胞的迁移情况并计算迁移率,结果显示慢病毒感染组从8h开始其细胞的迁移率较高(8h时P=0.01,24h时P=0.035);细胞粘附实验发现慢病毒感染组粘附细胞的数量较少(P0.05);两组细胞周期检测结果为,慢病毒感染组细胞G1期所占比例较高(P=0.034),S期所占比例较低(P=0.017),G2/M期无明显改变。结论:通过慢病毒感染,CXCL2基因在SMMC-7721肝癌细胞株上稳定过表达,CXCL2可促进SMMC-7721细胞的增殖、增强细胞迁移和侵袭能力,抑制细胞的粘附;根据两组细胞的细胞周期结果,推断细胞周期可能被阻滞在G1期。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

100× 100×图 1-1 慢病毒感染 SMMC-7721 组转染结果（100×）。A：光镜；B：荧光显微镜。Figure 1-1 lentiviral vector transfection into SMMC-7721 cells.3.2 qRT-PCR 检测两组细胞中 CXCL2 mRNA 的表达量。

肝癌细胞生物学功能的影响研究 2018 届硕士学位论文28图1-2 两组细胞CXCL2的mRNA相对表达情况。CON:空白对照组；OE：慢病毒感染组（。*P＜0.05）。Figure 1-2 The mRNA expression of CXCL2 in the two groups.（*P＜0.05）.3.3 Western Blot 检测两组细胞 CXCL2 蛋白表达情况两组细胞 CXCL2 蛋白表达情况如图 1-3 所示。过表达 CXCL2 慢病毒感染组 CXCL2 蛋白的表达高于空白对照组。CXCL2 11KDβ-actin 42KDOE CON图 1-3CXCL2 蛋白在两组细胞中的表达情况；OE：慢病毒感染组；CON：空白对照组。Figure 1-3 The expressions of CXCL2 protein in the two group cells .综上所述，稳定过表达 CXCL2 基因 SMMC-7721 肝癌细胞株构建成功。

2的mRNA相对表达情况。CON:空白对照组xpression of CXCL2 in the two groups.（*P＜t 检测两组细胞 CXCL2 蛋白表达CL2 蛋白表达情况如图 1-3 所示白的表达高于空白对照组。

【参考文献】

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本文编号：2764981