超声靶向微泡破坏对PEX基因转染鼠胶质瘤C6细胞影响的实验研究

发布时间：2020-07-23 00:56

【摘要】：目的(1)采用声诺维(SonoVue)联合超声辐照介导PEX基因转染鼠胶质瘤C6细胞,旨在探讨其可行性以及PEX基因对鼠胶质瘤C6细胞的影响。(2)将超声靶向微泡破坏与脂质体联合来增强PEX基因在鼠胶质瘤C6细胞的转染,旨在探讨超声靶向微泡破坏增强脂质体转染的可行性及优势所在。方法(1)体外生长良好的鼠胶质瘤C6细胞经0.25%胰酶消化计数后,按照2×105/孔的密度接种于6孔板,分为空白对照组、超声+微泡组、质粒组、质粒+微泡组、质粒+超声组、质粒+超声+微泡组。超声辐照参数为频率1MHz、辐照功率1.0W/cm2、持续时间30s、占空比20%。各组分别相应处理后继续培养24h,应用荧光显微镜观察各组细胞增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP)的表达情况、流式细胞仪检测各组荧光细胞比例以此来评估基因转染率、逆转录PCR检测细胞中PEX mRNA的表达量、流式细胞仪分析细胞周期的分布。(2)体外培养的鼠胶质瘤C6细胞按照实验要求可分为对照组、微泡组、超声组、超声+微泡组、脂质体组、超声+微泡+脂质体组。经过相应的处理,24 h后应用荧光显微镜观察EGFP的表达、流式细胞仪检测基因转染率。结果(1)质粒+超声+微泡组:荧光显微镜下表达绿色荧光的细胞最多,流式细胞仪检测基因转染率最高,逆转录PCR可见特异性PEX电泳条带高表达,流式细胞仪分析细胞周期分布G0/G1期百分数明显升高,与其他各组细胞相比,上述差异均有统计学意义(P均0.05)。(2)荧光显微镜下,超声+微泡+脂质体组可见大量EGFP表达,明显多于其他各组;流式细胞仪检测转染率,超声+微泡组为(8.59±1.94)%,脂质体组为(13.71±2.99)%,明显高于前者,差异有统计学意义(P0.05);超声+微泡+脂质体组为(18.31±2.66)%,明显高于其他各组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论(1)声诺维联合超声辐照可增强PEX基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染;体外实验中,PEX基因可通过影响细胞周期来抑制鼠胶质瘤C6细胞的增殖。(2)超声靶向微泡破坏可增强脂质体介导PEX基因在鼠胶质瘤C6细胞中的转染。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R445.1;R739.41
【图文】：

第一部分 超声靶向微泡破坏增强 PEX 基因转染鼠胶质瘤 C6 细胞的实验研究3 实验结果3.1 各组细胞的转染率1) 加入质粒的各组细胞于荧光显微镜下 EGFP 的表达（图 1-1）：空白对照组、超声+微泡组因未加入重组质粒 pEGFP-C1-PEX，所以无表达绿色荧光蛋白之说，不可能出现绿色荧光蛋白；质粒组、质粒+微泡组可见极少量绿色荧光蛋白或无绿色荧光蛋白表达；质粒+超声组可见少量绿色荧光蛋白表达；而质粒+微泡+超声组可见较多的绿色荧光蛋白表达，与以上各组细胞比较EGFP 表达量最多。

部分 超声靶向微泡破坏增强 PEX 基因转染鼠胶质瘤 C6 细胞的实0.18)％ ，两者之间差别无统计学意义(P＞0.05)；超声辐照基因转染率有一定程度的提高，为(1.02±0.29)％，与质粒组差异有统计学意义(P＜0.05)；而超声联合微泡共同作用时，提高，即质粒+超声+微泡组转染率为(8.59±1.94)％，与其计学意义(P 均＜0.05)。

图 1-3 加入质粒的各组细胞表达 PEX mRNA 的比较图1：质粒组；2：质粒+微泡组；3：质粒+超声组；4：质粒+超声+微式细胞仪检测 C6 细胞周期分布（表 1-1，图 1-4）白对照组相比，质粒+超声组细胞中G0/G1期细胞比例有一定的.47)％，两者间差异有统计学意义(P＜0.05)；而质粒+超声+微中G0/G1期细胞比例明显增加为(75.09±2.46)％，S期比例显.63)％，与其余各组细胞相比，差异均有统计学意义(P均0.05表 1-1 流式细胞仪检测 C6 细胞周期分布(％， x ±s) 别 G0/G1期 S期 G2对照组微泡组粒组微泡组51.18±1.2751.75±1.8752.05±2.6152.12±1.4728.84±1.8928.02±2.3228.57±1.8028.16±1.8519.920.219.319.7

【参考文献】

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本文编号：2766616