索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞的建立及其增殖和DNA甲基化水平的研究

发布时间：2020-08-09 21:54

【摘要】：背景:肝细胞癌(HCC)的发病率在全世界肿瘤中排名第五,死亡率位居世界第三。由于相当数量的患者在诊断时已为晚期HCC或合并存在肝脏基础疾病。这样的患者已经失去手术切除肿瘤的机会或进行肝移植。在这种情况下,以索拉菲尼为主的分子靶向治疗是一种重要的治疗手段可有效延长HCC患者的中位生存时间,但是耐药性的产生成为其应用的主要障碍。有相关研究表明,DNA甲基化可促进肿瘤对化疗药物耐药的发生。目的:在体外应用索拉菲尼作用诱导肝癌细胞系Hep3B和Huh7建立耐药模型并检测索拉菲尼耐药细胞增殖特性;检测索拉菲尼耐药细胞系DNA甲基化水平包括DNMTs和总DNA甲基化水平。方法:本研究利用索拉菲尼间歇诱导方法,建立Hep3B和Huh7索拉菲尼耐药细胞系。通过Western Blot,Dot Blot,CCK8和损伤愈合等实验及数据分析检测和评估肝癌索拉菲尼亲代细胞和耐药细胞增殖和DNA甲基化方面的差异。使用Graph Pad Prism5软件进行差异性分析,两组间比较应用t/t’检验方法(P0.05),明确肝癌索拉菲尼亲代细胞及耐药细胞数据差异及统计学意义。结果:实验在体外成功建立Hep3B和Huh7肝癌索拉菲尼耐药模型,CCK-8实验及数据分析显示:与索拉菲尼耐药细胞,亲代细胞增殖性可被索拉菲尼显著抑制,差异具有统计学意义。肿瘤成球实验显示,耐药细胞的肿瘤成球能力更强,差异具有统计学意义;划痕-愈合实验表明,耐药细胞表现出更强的迁移能力,差异具有统计学意义;蛋白印记实验表明耐药细胞DNMTs表达上调,差异具有统计学意义;斑点杂交实验显示耐药细胞总DNA 5mc水平更高,差异具有统计学意义。结论:建立肝癌索拉菲尼耐药模型,耐药细胞具有更高的增殖潜能;与亲代细胞相比,耐药细胞的DNA甲基化水平改变包括DNMTs上调、总DNA 5mc水平增强。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

亲代,成球,肿瘤细胞,细胞

图 4.1 CCK8 法检测索拉菲尼对 Huh7 亲代细胞以及耐药细胞增殖特点4.3 索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞的肿瘤成球能力更强如图 4.2 所示，肿瘤细胞成球实验检测亲代细胞和耐药细胞的自我更新能力，结果显示，耐药细胞成球显著多于亲代细胞，差异具有统计学意义( P ＜ 0. 05) 。

亲代,细胞,成球

4.1 CCK8 法检测索拉菲尼对 Huh7 亲代细胞以及耐药细胞增拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞的肿瘤成球能力更强 4.2 所示，肿瘤细胞成球实验检测亲代细胞和耐药细胞的自我，耐药细胞成球显著多于亲代细胞，差异具有统计学意义( P

实验检测,亲代,迁移能力,划痕

图 4.3 划痕-愈合实验检测亲代细胞和耐药细胞的迁移能力4.5 索拉菲尼诱导的肝癌耐药细胞 DNMTs 上调蛋白印记实验显示，索拉菲尼耐药细胞系中 DNMTs 表达上调（图 4.4），两组比较统计学差异明显。

【参考文献】