BRCA2回复突变与NACT-IDS后卵巢癌铂类抵抗的初步研究

发布时间：2020-08-12 13:40

【摘要】：目的:上皮性卵巢癌(Epithelial Ovarian Cancer,EOC)是妇女生殖系统方面最常见的恶性肿瘤之一,其临床特征为复发率高,预后差。初始治疗时,大约70%的卵巢癌患者对以铂类为基础的化疗敏感的。然而,有65%-75%复发的卵巢癌患者对以铂类为基础化疗无反应或发生抵抗,这是导致卵巢癌化疗失败和预后差的重要原因之一。获得性耐药是卵巢癌治疗中一个亟待解决的主要障碍,但其机制仍未阐明。许多学者对此进行了深入的研究,发现乳腺癌易感基因2(breast cancer susceptibility gene 2,BRCA2)发生回复突变可能是卵巢癌耐药的重要原因之一。然而,在卵巢癌中BRCA2回复突变情况与获得性铂类耐药是否相关,其对患者的预后是否存在影响,目前暂无相关临床研究。本实验旨在通过检测上皮性卵巢癌患者BRCA2的表达情况,并通过统计学分析,研究BRCA2是否存在回复突变,若存在,这种回复突变是否与患者的生存预后具有相关性,为新的临床治疗方案提供实验依据和方向。方法:1、通过EnVison二步免疫组化法检测了72例卵巢肿瘤的组织标本,全部病理检查均为卵巢浆液性癌,另取1例正常输卵管,1例副中肾管囊肿做对照。BRCA2的N端及C端,是否存在因蛋白截断出现N端存在,而C端缺失的状态。2、采集72例卵巢癌患者的相关临床病理资料,其中包括年龄(age)、FIGO分期(FIGO stage)、病理类型(Pathology)、病理分级(Histological grade)、腹水及胸水有无癌细胞(Malignant cells in ascites or hydrothorax)、肝肺阴道有无转移(Liver、lung or Vaginal metastasis)、淋巴结转移情况(Lymph node metastasis)、手术残留(Residual tumor)及复发时间(recurrent time)。3、根据患者术前有无化疗,分为初次手术组(PDS)和新辅助化疗-间期手术组(NACT-IDS)4、分析BRCA2回复突变是否与患者预后相关,BRCA2回复突变与术前铂类药物化疗有无相关性。结果:1、在72例标本中,抗BRCA2-N端抗体均有表达,并且表达强弱无明显区别;抗BRCA2-C端则部分表达。但是在正常输卵管组织、副中肾管囊肿以及恶性肿瘤组织中的表达较癌周组织、正常的卵巢组织好。2、通过相关性分析发现,抗BRCA2-C端的表达与卵巢癌腹水癌细胞阳性相关;3、初次手术组与新辅助化疗-间期手术组患者的BRCA2表达存在差异,且具有统计学意义(P=0.028),说明术前有无化疗对BRCA2的表达有影响。采用Kaplan-Meire对患者进行生存分析,Cox风险比例模型进行单因素及多因素分析,差异显著性检验采用Log-Rank检验。结论:1、BRCA2在新辅助化疗-间期手术组患者中,可能发生了回复突变,发生BRCA2回复突变的卵巢癌产生了对铂类化疗药物抵抗。2、BRCA2表达与否是影响新辅助化疗-间期手术组卵巢癌患者DFS的独立预后因素;且BRCA2表达属于不良预后因素。3、BRCA2的突变和回复突变可作为化疗过程中,检测卵巢癌患者是否发生突变以及有无回复突变,可作为患者选择化疗药物和调整化疗方案的依据。
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【图文】：

示意图,免疫组化,原理,示意图

（图 1 免疫组化原理示意图）切片处理蜡切片置于 67℃的烘箱中，烘片 2 小时。将甲苯中洗 2 次，每次 5 分钟；b。二甲苯与无钟；c。无水乙醇内按 95%-70%-50%的浓度梯修复抗原：取适量的抗原修复（柠檬酸）缓冲液高压锅内，封盖并上气阀，打开加热炉，高源，待自然冷却之后，用 PBS 缓冲液（0.01m次 3 分钟，最后将所有切片浸泡 PBS 缓冲液中

免疫组化检测,C端,分表,免疫组化

正常的BRCA2定位在细胞核，但突变后的BRCA2蛋白定位在细胞质。免疫组化实验结果显示，BRCA2 蛋白 N 端均有表达，但 C 端部分表达。见图 3-1。

免疫组化检测,情况,阳性对照,蛋白

A、B分别表示免疫组化检测BRCA2蛋白阳性对照N、C端均为阳性情况(x200)

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