青蒿琥酯对人唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞系增殖及侵袭迁移能力影响的体外研究

发布时间：2020-08-14 23:33

【摘要】：目的:通过体外实验检测青蒿琥酯(Artesunate,ART)对人颌下腺腺样囊性癌SACC-83细胞系体外增殖、侵袭迁移能力及侵袭迁移相关标志物表达的影响。方法:1.CCK-8法检测25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L,400μmol/L,800μmol/L,1600μmol/L和3200μmol/L ART作用于体外培养的人腺样囊性癌SACC-83细胞24 h、48 h和72 h后,对细胞增殖的影响,并根据结果筛选后续实验的用药浓度。计算半数致死浓度(IC50),后续实验以1/4 IC05、1/2 IC50为体外实验干预浓度设定范围的参考值;2.平板克隆试验检测ART对SACC-83单个细胞增殖和形成克隆能力的影响;3.细胞划痕实验检测不同浓度ART处理SACC-83细胞后对细胞移动能力的抑制作用;4.Transwell侵袭转移实验检测ART对SACC-83细胞侵袭及转移过程的影响;5.免疫细胞化学染色法检测不同浓度ART干预48 h后细胞中E-cadherin、VEGFA蛋白的表达水平;6.实时荧光定量PCR法检测不同浓度ART干预细胞48 h后,SACC-83细胞中E-cadherin、COX-2和VEGFA m RNA表达的变化。结果:1.CCK8实验结果显示不同浓度ART能有效抑制SACC-83细胞增殖,其抑制率随药物浓度及时间的增加而呈上升趋势,经计算分析,药物作用48 h ART对SACC-83细胞的IC50为462.60±35.15μM,IC05为59.28±39.86μM。后续实验以1/4 IC05 15μM、1/2 IC50 240μM为体外实验干预浓度设定范围的参考值,后续侵袭迁移实验药物干预浓度均选用15、30、60、120μM。2.平板克隆实验结果提示:不同浓度ART对SACC-83细胞克隆形成均有抑制作用,且各组间抑制率两两比较的差异均具有显著性的意义(P0.05),呈药物剂量依赖性。3.细胞划痕实验结果示:SACC-83细胞的迁移能力随ART浓度的增加而减弱,与对照组相比,ART对各实验组SACC-83细胞的愈合能力均有显著抑制的效果,各用药组间比较,细胞划痕愈合能力差异亦有显著性的意义(F=54.586,P0.001)。4.Transwell侵袭迁移实验结果显示:15μM ART即对SACC-83细胞的侵袭迁移能力有抑制作用,与对照组比较差异有显著性的意义(P0.05),随着药物浓度的提高,抑制作用增强。5.免疫细胞化学法检测结果示:SACC-83细胞中VEGFA抗体染色区域的平均光密度值随着ART药物浓度的增加而逐渐递减(F=326.054,P0.01),而E-cadherin抗体染色区域的平均光密度值则随着ART药物浓度的增加而上升(F=1503.760,P0.01)。6.RT-q PCR结果显示:各浓度ART干预后,E-cadherin基因表达呈现出明显的上升趋势(F=2513.935,P0.01),而VEGFA、COX-2基因m RNA的表达量均呈现不同程度的下调(F=319.580,P0.01),(F=185.828,P0.01)。各用药组与对照组相比差异具有显著性的意义(P0.01)。结论:1.ART可抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞系SACC-83的体外增殖及克隆形成。2.ART可抑制SACC-83细胞体外侵袭和迁移的生物学行为。3.ART可下调SACC-83细胞中VEGFA、COX-2的表达,上调E-cadherin的表达。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.87
【图文】：

抑制率,细胞的

检测 ART 对 SACC-83 细胞生长的影响5 μmol/L，50 μmol/L，100 μmol/L，200 μmol/L，4，1600 μmol/L 和 3200 μmol/L 共八种浓度 ART 的完全培养基干预 SACC-83 细胞 24 h、48 h 和 72 h 后度条件下 ART 对 SACC-83 细胞的抑制率。结果显SACC-83 细胞均有抑制作用，其抑制率随药物浓度图 1）。通过对重复三次实验所获的数据进行计算，RT 对 SACC-83 细胞的 IC50为 462.60 ± 35.15 μM，IC以 48 h 时 1/4 IC05、1/2 IC50为体外实验干预浓度设 15、30、60、120、240 μM 作为后续实验的药物干 ART 溶剂的对照组。

对照组,细胞克隆

ART(5 μmol/L) 311±10.1** 19.53±2.60ART(10 μmol/L) 245±7.5** 36.74±1.95ART(20 μmol/L) 166.3±8** 57.05±2.07ART(30 μmol/L) 85.7±6.4** 77.88±1.66ART(40 μmol/L) 33±4.4** 91.48±1.13注:与对照组相比，**P<0.01，*P<0.05ART 0 μM ART 5 μM ART 10 μM

细胞克隆,抑制率,划痕,细胞

图 3 不同浓度 ART 对 SACC-83 细胞克隆形成的抑制率itory rates ofART on the clone formation of SACC-83 cells, **P <验检测 ART 药物作用下 SACC-83 细胞迁，60，120 和 240 μmol/L 浓度 ART 的不含 AR培养液进行细胞划痕实验，分别在孵育 0h，2察 ART 对 SACC-83 细胞迁移能力的影响并拍件测量划痕区域的面积变化，计算公式：细胞 h 时划痕面积，实验重复三次，计算平均值，计学分析。结果显示：实验起始时，划痕区域的培养，对照组的划痕愈合明显，各实验组中T 浓度的增加而减小。与对照组相比，ART愈合能力均有显著抑制的效果，各用药组间比

【参考文献】