Elongator对肝癌细胞迁移侵袭和DNA损伤修复的影响及其机制研究

发布时间：2020-08-23 18:21

【摘要】：Elongator是一个多亚基复合物,包含有六个亚基,其中Elp3为核心亚基。Elongator具有多种功能,与多种细胞活动相关。本研究将分为两个部分探讨Elongator在肝癌细胞中的功能及其分子机制。第一部分为Elongator对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究。本研究中,我们发现Elongator可以促进肝癌细胞的迁移和侵袭。根据我们的实验结果,Elongator可以通过磷酸化AKT激活信号通路,上调基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达,进而促进肝癌细胞的迁移和侵袭。同时,我们还发现,Elp3表达缺失时,表皮生长因子(EGF)或肝细胞生长因子(HGF)诱导产生的AKT磷酸化显著降低。另外,在小鼠肿瘤肺转移模型中,过表达Elp3能够显著提升转移结节的形成。在人的肝癌病例样本中,Elp3与p-AKT在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织。这些结果表明Elongator在肝癌细胞的迁移和侵袭中发挥了重要的功能,为临床寻找肝癌转移靶标提供一定的理论依据。第二部分为Elongator在肝癌细胞DNA损伤修复中的作用机制。本研究中,我们发现Elongator复合物可促进辐照诱导的肝癌细胞DNA损伤修复,同时,我们比较了Elongator在肝癌细胞和正常肝细胞的DNA损伤修复过程中的不同作用。射线辐照诱导DNA断裂损伤后,细胞内DNA损伤感受器可迅速识别DNA的损伤断裂点并在损伤处募集大量的DNA损伤修复因子修复损伤断链的DNA。根据我们的实验结果,在肝癌细胞中,Elongator能够在DNA损伤后转运进入细胞核,与ATM结合维持较高程度的ATM磷酸化并促使ATM的磷酸化时间延长。同时,我们发现Elp3为ATM的靶基因,一旦ATM信号激活,Elp3的蛋白表达会随之上调。在正常肝细胞中,Elongator复合物Elp3亚基的表达在DNA损伤后也显著上调,但无法转运入核与ATM结合,因而,Elongator复合物对正常肝细胞的DNA损伤修复没有显著影响。以上结论初步阐明了Elongator复合物在DNA损伤修复中的作用机理,Elongator作为潜在的DNA损伤修复基因能够上调肝癌细胞的DNA损伤修复速度,使肝癌细胞获得放疗抵挡从而促进肝癌的发展,并为肝癌的放疗增敏提供了理论依据。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R735.7
【图文】：

肝癌细胞

Elongator 对肝癌细胞迁移侵袭和 DNA 损伤修复的影响及其机制研究第一部分在补充 Elp3 蛋白表达后，实验组 Elp3i+Elp3o 穿膜细胞数目显著高于对照组Elp3i+Vector。图 3.1-b 实验结果显示，过表达 Elp3 的 Hep3B 细胞（Elp3o）穿膜细胞数目显著高于 Hep3B 细胞对照组（Control），干扰 Elp3 表达的 Hep3B 细胞（Elp3i）穿膜细胞数目则显著低于 Hep3B 细胞对照组（Control）和转染空载体的Hep3B 细胞（Vector）。以上实验结果表明，过表达 Elp3 可以显著增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力，而干扰 Elp3 表达则显著降低肝癌细胞的迁移和侵袭能力。

肝癌细胞

（Elp3i）穿膜细胞数目则显著低于 Hep3B 细胞对照组（Control）和转染空载体的Hep3B 细胞（Vector）。以上实验结果表明，过表达 Elp3 可以显著增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力，而干扰 Elp3 表达则显著降低肝癌细胞的迁移和侵袭能力。图 3.1-a：Elp3 促进肝癌细胞 HepG2 的迁移和侵袭图注：Elp3o 组与对照组（Control）相比较，Elp3i 组与 Control 组相比较，穿膜细胞数目具有显著差异；Elp3i+Elp3o 与 Elp3i+Vector 组相比较，穿膜细胞数目具有显著差异；*：p<0.05，**：p<0.01，#：p<0.05，##：p<0.01。

mRNA表达量,肝癌细胞,磷酸化

迁移侵袭和 DNA 损伤修复的影响及其机制研究究在肝癌细胞中 Elp3 对 AKT 磷酸化的影响，我（图 3.2-e 和图 3.2-f）和 HepG2（图 3.2-g 和图 32μg、3μg、4μg 的 Elp3 过表达质粒（CMV4-El后，提取蛋白进行 Western Blot 实验检测 Elp3 蛋实验结果如图所示，AKT 的磷酸化程度随 Elp3 蛋着 Elp3 蛋白表达的减少，AKT 的磷酸化程度也随lp3 的表达可促进 AKT 的磷酸化，并且两者之间验结果，Elp3 可促进 AKT 的磷酸化作用激活 A相关因子 MMP-2 和 MMP-9 的基因转录水平和蛋

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