STEAP1对乳腺癌侵袭转移影响的研究

发布时间：2020-09-01 09:18

　　 研究背景:乳腺癌是在全世界范围内导致女性死亡常见的几种恶性肿瘤之一,目前针对乳腺癌生物标志物和免疫学的治疗研究均已开展,挖掘与乳腺癌有关的标志物对于制定乳腺癌患者的预防和治疗策略尤为重要。STEAP1(six-transmembrane epithelial antigen of the prostate 1)最初是在前列腺癌中发现,作为细胞表面抗原,主要定位在细胞膜上,在细胞连接或细胞黏连中作为离子通道或转运蛋白参与细胞通讯。基于STEAP1作为靶点的抗体免疫治疗已经应用于前列腺癌中,关于乳腺癌与STEAP1关系的研究,国内尚未开展,国外研究较少且结论不一,对其作用机制的了解甚少。上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)与癌症的发生、发展关系密切。在EMT进展期间,细胞骨架结构和形态改变,上皮细胞粘附和细胞极性消失,运动能力显著增加。上皮细胞获得间充质细胞的形态和特征,从而增强细胞迁移和侵袭能力。对EMT生物标志物的研究已广泛开展。STEAP1参与细胞连接以及细胞通讯,与EMT过程可能存在一定相关性,通过研究STEAP1表达与EMT标志物的关系,可以探究STEAP1在EMT过程中发挥的作用。研究目的1.探究STEAP1在乳腺癌中的表达情况及与临床病理特征的关系。2.慢病毒介导的STEAP1表达的变化对乳腺癌细胞和乳腺上皮细胞的运动和增殖的影响。3.探究STEAP1影响乳腺癌发生和进展的作用机制。研究方法1.免疫组织化学法(IHC)检测正常乳腺组织,良性纤维腺瘤和癌组织中STEAP1的表达。2.逆转录-定量聚合链反应实验(RT-qPCR)、免疫印迹实验(Western blot)和免疫细胞化学实验(ICC)检测乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中STEAP1的表达情况;3.运用公共数据库Oncomine和Kaplan-Meierplotter从大数据中探寻STEAP1在乳腺癌中的表达情况及其与预后的关系;4.利用慢病毒进行转染,增强STEAP1在乳腺癌细胞MCF-7的表达,降低STEAP1在乳腺上皮细胞HBL-100的表达,并通过RT-qPCR、Western blot验证转染效率;5.使用Transwell,生长曲线和流式细胞术来检测STEAP1表达对乳腺细胞运动和增殖的影响。6.RT-qPCR检测转染前后乳腺细胞中EMT相关标志物的表达情况。研究结果1.免疫组织化学结果表明STEAP1在正常乳腺组织和良性纤维腺瘤中的表达水平程度明显高于乳腺癌组织,且与淋巴结转移、分化程度及组织学分级有关,STEAP1表达高者生存时间更长;2.RT-qPCR、ICC及Western blot表明STEAP1 mRNA及蛋白质在乳腺上皮细胞HBL-100中表达明显高于乳腺癌细胞系BT549、MDA-MB-468和MCF-7;3.公共数据库分析显示,乳腺癌组织中STEAP1 mRNA的表达水平显着低于正常组织,且STEAP1表达水平越高,预后越好。4.荧光显微镜下观察慢病毒转染效率超过80%,RT-qPCR以及Western blot均验证;5.慢病毒介导STEAP1过表达后,乳腺癌细胞迁移、侵袭能力降低(P0.05),增殖能力无明显变化;RNA干扰降低STEAP1表达后,乳腺上皮细胞迁移、侵袭能力增强(P0.05),增殖能力无明显变化;6.慢病毒介导STEAP1过表达后,乳腺癌细胞中MMP2、MMP9、MMP13、VIM、CDH2表达降低,CDH1表达增高,EMT过程受到抑制;RNA干扰降低STEAP1表达后,乳腺上皮细胞HBL-100中MMP2、MMP9、MMP13、VIM、CDH2表达增高,CDH1表达降低,促进了 EMT进展。研究结论1.STEAP1在乳腺癌中的表达低于正常组织,是乳腺癌中的抑癌因子;2.STEAP1的表达可抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力;3.STEAP1在乳腺癌中的作用机制与EMT有关,其表达能抑制EMT进展。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.9
【部分图文】：

４．１．１逦ＳＴＥＡＰ１在乳腺组织的表达逡逑免疫组化结果表明，ＳＴＥＡＰ１在正常乳腺组织和乳腺纤维腺瘤中的表达程度明显逡逑高于乳腺癌，且染色主要是集中在胞膜和胞浆，在细胞核中没有表达，见图１。逡逑在正常乳腺组织中ＳＴＥＡＰ１高表达者所占百分率为８５％邋（３４／４０），乳腺纤维腺瘤逡逑中为８４．６％邋（４４／５２），逦明显高于乳腺癌组织的１１．８％邋（２５／２１１），卡方检验结果逡逑显示Ｐ＜０．０１，差异有统计学意义，见表１。进一步两两比较，ＳＴＥＡＰ１在正常乳逡逑腺组织和纤维腺瘤的表达水平均显著高于癌组织（Ｐ＜０．０１），而正常乳腺组织和逡逑纤维腺瘤间的表达水平没有统计学差异。逡逑２３逡逑

根据乳腺癌患者ＳＴＥＡＰ１表达情况，将患者分为高表达组和低表达组，对两逡逑组乳腺癌患者进行Ｋａｐｌａｎ－ｍｅｉｅｉ？生存分析，结果显示ＳＴＥＡＰ】高表达的病例预后逡逑好于低表达病例，生存时间更长（尸＜０．０５），见图２。逡逑Ｓｕｒｖｉｖａｌ邋Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ逡逑ｉａ￣邋＝＾ｕ逡逑＼邋Ｈ逦￣ｌ＿逦ｈｉＫｈ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑０＾２２逡逑°－８￣逦Ｌ邋－ｒ逦￣Ｌ—逦ｌｏｗ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ逡逑Ｉ逦＼逡逑！邋ｗ逦ｖ逦ｉ—一逡逑？逦ｎ－１５８逦＼逦—Ｉ逡逑Ｕ邋０－４－逦＼逦Ｌ逡逑ｕ逦尸邋＜０．０５逦Ｉ逦，逡逑°－２￣逡逑０Ｊ０－逦逦＊逡逑ｎ￣￣ｉ逦：逦ｉ逦ｉ逦＼￣＊￣￣￣￣逡逑２０Ｘ１０逦４０Ｊ５Ｕ逦６０邋Ｊ０Ｑ逦８０＊００逦１？ＯＸ）０逡逑Ｔｉｍ＃ǎ椋睿酰睿簦欤椋螅

本文编号：2809555