目的:(1)观察Smac类似物LCL161对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响。(2)探讨LCL161诱导非小细胞肺癌产生并加快其凋亡的可能性机制。方法:(1)将人非小细胞肺癌细胞株A549培养于恒温细胞培养箱中,完全培养基为含10%FBS及1%双抗的RPMI1640培养基。(2)细胞培养24h后,改用无血清的培养基并用按设计配好的不同浓度的药物处理细胞。(3)将处于对数期的A549细胞分为对照组(0.1%二甲基亚砜)及5、10、20mmol/L LCL161组分别采用相应药物干预24h、48h、72h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增值情况。(4)Hoechst荧光染色法观察LCL161对A549细胞的凋亡诱导作用。(5)取对照组及5、10 mmol/L LCL161组培养48h后的细胞,用免疫印迹试验法检测X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)的蛋白表达情况,观察LCL161在A549细胞凋亡中的作用。结果:(1)对照组、5 mmol/L LCL161组、10 mmol/L LCL161组、20 mmol/LLCL161组A549细胞A490值依次降低(均P0.05);5 mmol/L LCL161组、20 mmol/L LCL161组A549细胞A490值随时间延长而降低(均P0.05),10 mmol/L LCL161组A549细胞72h A490值均低于24h、48h(均P0.05)。(2)Hoechest33258荧光染色结果显示,用5、10、20mmol/L LCL161处理48小时后A549细胞凋亡数分别为(10.00±2.45)、(29.8±3.63)、(58.40±3.51)个/HP,均高于对照组的(3.20±1.30)个/HP(均P0.05)。(3)Western blot检测凋亡蛋白显示,与对照组比较,实验组细胞XIAP表达量降低,Bax和Caspase-3表达量增加,(均P0.05)。结论:(1)Smac类似物LCL61能够显著地抑制人肺腺癌A549细胞株的增殖能力。(2)LCL161对肺癌细胞A549细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调XIAP、上调Bax和Caspase-3相关。
【学位单位】:广西医科大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2018
【中图分类】:R734.2
【参考文献】
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本文编号:
2811818
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