HtrA1丝氨酸蛋白酶在肝癌中的生物学功能及介导化疗耐受的实验研究

发布时间：2020-09-12 20:33

　　 目的:研究肝癌细胞株中HtrA1丝氨酸蛋白酶(HtrA1 serine protease)表达下调对增殖、迁移、侵袭及凋亡等细胞生物学特性的影响,并探讨其对肝癌化疗敏感性的变化。方法:检测HtrA1在不同肝癌细胞株中的表达情况,选择较高表达的肝癌细胞系构建HtrA1稳定下调的HCC细胞系及空载病毒转染的对照细胞系。划痕愈合试验检测细胞迁移能力的改变。使用不同浓度阿霉素分别作用于HtrA1干扰的HCC细胞和对照组细胞,使用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞分析技术、Western blotting检测细胞凋亡及相关蛋白的变化。结果:成功构建HtrA1稳定下调表达的人肝癌细胞株HepG2及Huh7,以及相对应的空载病毒转染的对照细胞系。划痕实验结果显示,划痕后24h,HepG2及Huh7的HtrA1低表达组相对迁移距离明显高于空白转染组。CCK-8增殖实验结果表明HtrA1低表达的细胞株迁移能力明显增强;流式细胞凋亡检测结果显示,HtrA1低表达组凋亡细胞少于空白转染组;Western blotting检测结果表明HtrA1低表达组中凋亡抑制蛋白XIAP表达明显高于空白对照组,而凋亡蛋白Caspase-3在HtrA1低表达组则明显低于空白对照组;CCK-8凋亡实验结果表明在不同浓度阿霉素作用下,HtrA1低表达的细胞株存活率明显高于空白对照组;差异均有统计学意义。结论:HtrA1下调表达可显著增强HepG2及Huh7细胞的增殖、迁移及侵袭能力,提示HtrA1参与调控肝癌细胞的生物学功能,并与肿瘤侵袭转移密切相关;下调HtrA1表达后,肝癌细胞对阿霉素的杀伤效应降低,提示HtrA1有望成为肝癌化学治疗的新靶点。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7
【部分图文】：

测显示在 HtrA1 在 MHCC-97L,MHCC-97L, HepHCCLM3 等细胞系中表达情况。下调表达的肝癌细胞株 Huh7 和 HepG2技术构建 HtrA1 稳定下调表达的人肝癌细胞 Huh7A 及 LV-NC 分别转染 Huh7 和 HepG2 细胞株，通 2）。

图 2：RT-PCR 检测两株细胞 HtrA1 mRNA 表达水平证明实验组细胞株 HtrA1 mRNA 表达明显下调。 HtrA1 下调表达对肝癌细胞增殖能力的影响

CCK-8试验比较各组稳定转染细胞的增殖能力0244872Time(h)

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 李冉;张旗;;丝氨酸蛋白酶HtrA1在人牙周膜组织中的表达及对人牙周膜细胞增殖的影响[J];中华口腔医学杂志;2016年02期

2 ;Serine protease HtrA1 expression in human hepatocellular carcinoma[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2010年05期

本文编号：2817891