GSTM2在胰腺癌化疗耐药中的机制研究

发布时间：2020-09-18 20:26

　　谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)不仅有细胞保护作用,而且参与抗癌药物耐药性的产生。但是,GST同工酶在胰腺癌化疗耐药中的作用仍不清楚。本研究将检测GSTM2基因在经吉西他滨处理的胰腺癌细胞株及接受新辅助化疗的胰腺癌患者癌组织中的表达。并通过siRNA及shRNA沉默GSTM2基因,分别转染胰腺癌细胞及注入裸鼠胰腺构建原位移植瘤模型后用吉西他滨处理,从体外、体内实验两个层面观察在胰腺癌中沉默GSTM2对吉西他滨敏感性的影响。最后分析GSTM2在胰腺癌患者中的表达及与临床预后的相关性。结果表明吉西他滨处理可以增加胰腺癌细胞株及胰腺癌组织中GSTM2的表达。沉默GSTM2可使经吉西他滨处理的胰腺癌细胞的凋亡增加、活力降低,体内实验进一步表明在裸鼠胰腺原位移植瘤模型中利用shRNA诱导GSTM2沉默,能增强吉西他滨化疗的药物敏感性。研究还发现,GSTM2在胰腺癌组织中的表达低于正常胰腺组织,而GSTM2的高表达则与胰腺癌患者生存率高、预后好呈显著相关。综上所述,GSTM2能使接受吉西他滨处理的胰腺癌细胞产生耐药性并存活,故吉西他滨也能增加胰腺癌细胞株中GSTM2的表达,GSTM2在胰腺癌中的沉默有益于增强吉西他滨的化疗效果,胰腺癌患者中GSTM2的高表达与总体生存期显著相关。因此,GSTM2有潜力成为优化胰腺癌化疗方案选择和预测胰腺癌预后的生物标志物。一、GSTM2在经吉西他滨处理的胰腺癌细胞株及接受新辅助化疗的胰腺癌患者癌组织中的表达研究目的:分析吉西他滨处理胰腺癌细胞及癌组织对GSTM2表达的影响。材料和方法:利用qRT-PCR和western blot检测吉西他滨处理前后GSTM2在胰腺癌细胞株中的表达情况。收集接受吉西他滨新辅助化疗后手术和仅接受外科手术的胰腺癌患者的癌组织标本,进行免疫组化染色,比较两组中GSTM2表达水平的差异。结果:GSTM2在经吉西他滨处理的胰腺癌细胞株中的表达水平明显高于未经吉西他滨处理的对照组;在接受吉西他滨化疗的胰腺癌患者组织中的表达水平明显高于仅接受外科手术的患者。结论:吉西他滨能使胰腺癌细胞和胰腺癌组织中的GSTM2表达水平上升,初步证实GSTM2参与胰腺癌吉西他滨化疗耐药性产生。二、沉默GSTM2对胰腺癌化疗敏感性影响的体外实验研究研究目的:检测siGSTM2对吉西他滨处理胰腺癌细胞株的化疗敏感性的影响。材料和方法:运用siRNA技术沉默BXPC-3、Panc-1、L3.6pl和MPanc96四种胰腺癌细胞株中的GSTM2基因,利用qRT-PCR和western blot检测沉默效果。再用吉西他滨处理上述细胞株,通过流式细胞仪检测癌细胞的凋亡水平,应用MTT分析法检测细胞活力。结果:qRT-PCR和western blot检测结果示siRNA转染4种胰腺癌细胞株成功,沉默GSTM2效率高,均在60%以上。经吉西他滨处理后,siGSTM2组与siControl组相比癌细胞凋亡率明显更高、活力显著降低。结论:siGSTM2能在胰腺癌细胞株中高效沉默GSTM2基因。沉默GSTM2能增强胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性。三、沉默GSTM2对胰腺癌化疗敏感性影响的体内实验研究研究目的:检测shGSTM2对裸鼠胰腺原位移植瘤行吉西他滨化疗敏感性的影响。材料和方法:用shGSTM2对胰腺癌细胞株Mpanc96进行转染,行qRT-PCR和western blot检测评估沉默效果。将证实已被shRNA成功转染的Mpanc96细胞株原位注入裸鼠胰腺,构建裸鼠胰腺原位转移瘤模型。用IVIS成像系统予以生物荧光成像明确成瘤效果。用吉西他滨处理胰腺癌原位瘤后,用Living Image软件程序进行定量分析瘤体体积变化。结果:shRNA转染Mpanc96成功且沉默GSTM2效果佳。生物荧光成像可见裸鼠胰腺位置有荧光信号,移植瘤成瘤,建模成功。shGSTM2+吉西他滨组裸鼠瘤体体积最小。结论:沉默GSTM2能在体内增强胰腺癌吉西他滨化疗的敏感性。四、GSTM2在胰腺癌患者中的表达与临床预后相关性的研究研究目的:分析GSTM2在胰腺癌患者中的表达及与临床预后的相关性。材料和方法:收集于我院确诊胰腺癌的50例手术患者的癌组织标本,以癌旁组织及正常人的胰腺组织样本作为对照,检测GSTM2的mRNA表达水平的差异。根据GSTM2的平均蛋白表达量将胰腺癌样本分为GSTM2低表达组和GSTM2高表达组,分析两组生存期的差异。结果:GSTM2在胰腺癌患者胰腺组织样本中的表达显著低于癌旁组织及正常人的胰腺组织样本。GSTM2低表达组的胰腺癌患者较高表达组患者的总体生存率低,预后差。结论:GSTM2在正常人中的表达高于胰腺癌患者,且GSTM2高表达与胰腺癌患者生存率高、预后好呈显著相关。总结上述研究,可得出结论如下:1、吉西他滨可以增加胰腺癌中GSTM2的表达。2、沉默GSTM2可使经吉西他滨处理的胰腺癌细胞凋亡增加、活力降低。3、沉默GSTM2能使接受吉西他滨化疗的裸鼠胰腺原位移植瘤体积缩小,在体内增强吉西他滨化疗的敏感性。4、GSTM2在正常人中的表达高于胰腺癌患者,且GSTM2高表达与胰腺癌患者生存率高、预后好呈显著相关。5、GSTM2有潜力作为生物标志物筛选对吉西他滨高敏感的胰腺癌患病人群行精准治疗,同时预测胰腺癌的预后。
【学位单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.9
【部分图文】：

吉西他滨,表达水平

（一）吉西他滨处理前后GSTM2在胰腺癌细胞株中的表达情况1、qRT-PCR 结果如图1-1所示，在经5μmol/L吉西他滨处理过的L3.6pl, Panc-1, MPanc96, BXPC-3,SU86.86 和 Hs766T 胰腺癌细胞株中，GSTM2 的 mRNA 表达水平显著高于未经吉西他滨处理的对照组（“+”代表经吉西他滨处理，“－”代表未经吉西他滨处理，#P < 0.05，*P < 0.01）。2、Western blot 结果为进一步明确 GSTM2 在蛋白质水平的表达结果，进行了免疫印迹检测。结果如图 1-2 条带所示，经吉西他滨处理的胰腺癌细胞株组 GSTM2 的蛋白表达水平高于未经处理组（“+”代表经吉西他滨处理，“－”代表未经吉西他滨处理）。综合上述结果

吉西他滨,硕士学位论文,表达水平

吉西他滨处理胰腺癌细胞株对GSTM2蛋白表达水平的影响

吉西他滨,新辅助化疗,接受手术,免疫组化染色

新辅助化疗组（A）和仅接受手术组（B）患者组织标本GSTM2免疫组化染色

【参考文献】