SM22α在结直肠癌中的表达及作用

发布时间：2020-09-19 19:51

　　 第一部分SM22α在结直肠癌中的表达目的:探讨结直肠癌组织及对应的癌旁正常组织中SM22α的mRNA和蛋白表达水平的差异,以及mRNA和蛋白表达的相关性,并将SM22α蛋白的表达水平与结直肠癌患者的临床病理参数进行相关性分析。方法:应用RT-qPCR检测SM22α的mRNA表达水平,应用Western blot检测SM22α蛋白的表达水平,应用Pearson Correlation Coefficients检验分析SM22α的mRNA和蛋白表达的相关性。结果:RT-qPCR结果显示,与对应的癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中SM22α的mRNA表达水平明显减少,差异有统计学意义(P0.001);Western blot结果显示,与对应的癌旁正常组织相比,结直肠癌组织中SM22α蛋白表达水平明显减少,差异有统计学意义(P0.001);Pearson Correlation Coefficients检验分析显示,结直肠癌组织中SM22α的mRNA与蛋白表达一致(r=0.718,P0.01);78例结直肠癌患者中50(68.5%)例癌组织中SM22α蛋白表达低于其对应的癌旁正常组织,28(31.5%)例癌组织中SM22α蛋白表达与其对应的癌旁正常组织相比,无明显差异或表达上调,将癌组织中SM22α表达下调的50例患者定义为低表达组,癌组织中SM22α表达无差异或上调的28例患者定义为高表达组,SM22α蛋白表达水平与结直肠癌患者的肿瘤分化程度、性别、年龄、临床分期、肿瘤部位、肿瘤浸润深度和淋巴结转移均无关(P0.05)。结论:结直肠癌组织中SM22α的mRNA和蛋白表达下调,且mRNA与蛋白表达水平一致,SM22α蛋白表达水平下调与结直肠癌患者的临床病理参数无关。第二部分Sm22α基因启动子区甲基化在结直肠癌中的作用目的:检测结直肠癌组织和对应的癌旁正常组织中Sm22α基因启动子区甲基化状态,以及甲基化对SM22α蛋白表达的影响,探讨癌组织中Sm22α基因启动子区甲基化与结直肠癌患者临床病理参数及预后的关系。方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR)技术分别检测78例结直肠癌患者的癌组织及对应的癌旁正常组织中Sm22α基因启动子区甲基化状态,应用χ2检验分析对比两组间Sm22α基因启动子区甲基化差异与临床病理参数的关系,应用Kaplan-Meier法分析癌组织中SM22α甲基化与结直肠癌患者总体生存期的关系。结果:Methylation-specific PCR结果显示,结直肠癌组织中有43例(59.0%)Sm22α基因启动子区呈甲基化状态,35例(41.0%)呈非甲基化状态,对应的癌旁正常组织中有19例(21.9%)Sm22α基因启动子区呈甲基化状态,59例(78.1%)呈非甲基化状态,结直肠癌组织中Sm22α基因启动子区甲基化水平高于对应的癌旁正常组织(χ2=15.418,P0.001);Western blot(第一部分)和Methylation-specific PCR结果显示,78例结直肠癌组织中SM22α蛋白表达下调且Sm22α基因启动子区呈甲基化状态者40例,SM22α蛋白表达增高且Sm22α基因启动子区呈非甲基化状态者25例,SM22α蛋白表达下调且Sm22α基因启动子区呈非甲基化者10例,SM22α蛋白表达增高且Sm22α基因启动子区呈甲基化状态者3例,关联性分析显示,结直肠癌组织中Sm22α基因启动子区甲基化状态与SM22α蛋白表达负相关(r=-0.668,P0.001);癌组织中Sm22α基因启动子区非甲基化的结直肠癌患者和甲基化的患者术后随访3年总生存率分别为88.57%和67.44%,Sm22α基因启动子区非甲基化患者术后随访3年总生存率较甲基化患者升高(P0.05),Sm22α基因启动子区非甲基化的结直肠癌患者和甲基化的患者术后3年无复发生存率分别为80%和67.44%,Sm22α基因启动子区非甲基化患者术后随访3年无复发生存率较甲基化患者升高(P0.05);癌组织中Sm22α基因启动子区甲基化状态与结直肠癌患者临床病理参数关系的分层分析显示,在结直肠癌组织中Sm22α基因启动子区甲基化状态与患者的性别、年龄、分化程度、临床分期、有无淋巴结转移、浸润深度和肿瘤部位均无关(P0.05)。结论:Sm22α基因启动子区甲基化水平在结直肠癌组织中升高,并与其蛋白表达负相关;癌组织中Sm22α基因启动子区高甲基化率与结直肠癌患者的不良预后有关,但与临床病理参数无关。第三部分沉默SM22α表达对人结肠癌细胞株HCT116生物学行为的影响目的:沉默SM22α表达对人结肠癌细胞株HCT116增殖能力、克隆形成能力、细胞周期及MMP-9表达的影响,经5-Aza-2-Deoxycytidine处理去甲基化后SM22α的mRNA及蛋白表达情况。方法:应用siRNA-SM22α转染人结肠癌细胞株HCT116,RT-qPCR检测Sm22α基因mRNA表达情况,Western blot检测SM22α蛋白表达情况,沉默SM22α表达后MTS实验检测HCT116细胞增殖活性、平板克隆实验检测HCT116细胞克隆形成能力、流式细胞技术检测对HCT116细胞周期的影响,RT-qPCR检测沉默Sm22α后MMP-9 mRNA的表达水平,Western blot检测MMP-9蛋白表达水平,经5-Aza-Dc处理人结肠癌细胞株HCT116 Sm22α基因去甲基化后,RT-qPCR检测Sm22α基因mRNA表达情况,Western blot检测SM22α蛋白表达情况。结果:siRNA-SM22α转染48小时后RT-qPCR结果显示,siRNA组较siRNA-NC和未转染组Sm22α基因mRNA表达水平降低(P0.05),Western blot结果显示,si RNA组较siRNA-NC和未转染组SM22α蛋白表达水平降低(P0.05);MTS结果显示,接种48小时、72小时和96小时后,人结肠癌细胞株HCT116 siRNA组的OD值,分别较相应时间的si RNA-NC组和未转染组升高(P0.05),而siRNA-NC组的OD值和未转染组相比,无明显差异(P0.05);平板克隆实验结果显示,人结肠癌细胞株HCT116细胞siRNA组克隆形成数较si RNA-NC和未转染组相比明显增加(P0.05),而siRNA-NC组的克隆形成数和未转染组相比,无明显差异(P0.05);流式细胞检测结果显示,沉默SM22α表达后si RNA组增殖指数与未转染组相比升高(P0.05),而si RNA-NC组增殖指数和未转染组相比无明显差异(P0.05);RT-qPCR检测结果显示沉默SM22α表达后,与未转染组相比,siRNA组MMP-9 mRNA的表达水平升高(P0.05),而siRNA-NC组和未转染组相比无明显差异(P0.05),Western blot结果显示,与未转染组相比,siRNA组MMP-9的蛋白表达水平升高(P0.05),而siRNA-NC组和未转染组相比无明显差异(P0.05);经5-Aza-Dc处理Sm22α基因去甲基化后,RT-qPCR结果显示去甲基化组细胞Sm22α基因mRNA表达水平较未处理组细胞升高(P0.05),Western blot检测证实去甲基化组细胞SM22α蛋白表达水平较未处理组细胞升高(P0.05)。结论:沉默SM22α表达促进人结肠癌细胞株HCT116的增殖活性、克隆形成能力及上调MMP-9表达,Sm22α基因去甲基化后其mRNA和蛋白表达水平升高。结论:1.结直肠癌组织中SM22α的mRNA及蛋白表达水平下调,且mRNA与蛋白表达水平一致;结直肠癌组织中SM22α蛋白表达下调与患者的临床病理参数无关。2.Sm22α基因启动子区甲基化水平在结直肠癌组织中升高,并与其蛋白表达成负相关;结直肠癌组织中Sm22α基因启动子区高甲基化与患者的不良预后有关,但与临床病理参数无关。3.沉默SM22α表达促进人结肠癌细胞株HCT116的增殖活性、克隆形成能力及上调MMP-9的表达水平;Sm22α基因去甲基化后其mRNA和蛋白表达水平升高。
【学位单位】：河北医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.34
【部分图文】：

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20图 1 RNA 电泳图Fig.1 Agarose gel electrophoresis for RNAAB

图 3 SM22α 在结直肠癌组织及对应的癌旁正常组织中蛋白表达 Expression of SM22α in colorectal cancer tissues (Ca) and adal tissues (N). A: Representative results of western blot analysent normal tissues. Ca, colorectal cancer tissues. B: Densitoing analysis for the blots; ***P<0.001 cancer tissues vs. normal tis

图 3 SM22α 在结直肠癌组织及对应的癌旁正常组织中蛋白表达ig.3 Expression of SM22α in colorectal cancer tissues (Ca) and adormal tissues (N). A: Representative results of western blot analysdjacent normal tissues. Ca, colorectal cancer tissues. B: Densitocanning analysis for the blots; ***P<0.001 cancer tissues vs. normal tis

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