GOLPH3通过mTOR信号通路调控肝细胞癌的发生及其与中医证型的关系

发布时间：2020-09-19 18:56

　　目的:探讨高尔基体蛋白3(GOLPH3)在肝细胞癌(HCC)中的功能及作用机制,并探讨GOLPH3与HCC患者临床特征及中医证型的相关性,以期为肝细胞癌患者提供新的治疗策略。方法:1.采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR技术检测HCC临床标本和HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA及蛋白的表达水平,并采用卡方检验分析GOLPH3的蛋白表达水平与HCC患者临床特征的相关性。2.采用SiRNA沉默HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H的GOLPH3基因来研究GOLPH3的功能:通过MTT法分析细胞增殖;Annexin V-FITC/PI染色和hoechst 33342染色检测凋亡细胞,并检测细胞半胱天冬酶3/7活性,三者结合研究GOLPH3对HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H凋亡的影响。3.使用慢病毒转染的方法,构建并筛选GOLPH3稳定低表达的MHCC97L、MHCC97H细胞,建立GOLPH3稳定低表达的MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤模型来研究GOLPH3在体内肿瘤生长中的作用。4.采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测GOLHP3在mTOR信号通路中的作用。5.采用mTOR信号通路的激活剂MHY1485验证GOLHP3在mTOR信号通路中的作用。6.运用Fisher精确检验分析HCC中医证型与GOLPH3表达及患者临床特征的相关性。结果:1.HCC临床标本和HCC细胞株MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3 mRNA和蛋白表达水平与正常对照组相比显著上调(P0.05)。卡方检验结果表明在HCC患者中GOLPH3的表达水平与血清AFP水平显著相关(P=0.006);GOLPH3的表达水平与性别、年龄、HBsAg、肿瘤大小、血管侵袭和肝硬化之间没有明显的相关性(P0.05)。2.SiRNA沉默MHCC97L、MHCC97H细胞中GOLPH3的表达均能使细胞增殖受到抑制并且促进细胞凋亡。3.慢病毒敲低GOLPH3表达导致MHCC97L、MHCC97H皮下移植瘤生长受限。4.HCC临床标本癌组织中mTOR信号通路相关的关键蛋白mTOR,AKT和S6K1(p70核糖体蛋白S6激酶)磷酸化水平明显高于正常肝组织(P0.05)。体外和体内实验表明,抑制MHCC97L、MHCC97H中GOLPH3的mRNA和蛋白的表达水平后,mTOR、AKT和S6K1蛋白的磷酸化水平与正常对照组相比显著降低(P0.05)。5.mTOR激活剂MHY1485可以部分抵消因GOLPH3沉默所引起的MHCC97L、MHCC97H细胞的凋亡。6.Fisher精确检验分析结果表明HCC中医证型与HCC临床标本中GOLPH3蛋白表达水平无明显的相关性(P0.05),与HCC患者临床特征之间亦无明显的相关性(P0.05)。结论:本研究表明,GOLPH3可能通过激活mTOR信号通路促进肝癌的发生,GOLPH3可能是一种潜在的HCC生物标志物和治疗靶点,为以GOLPH3为HCC生物标志物的诊疗策略及以GOLPH3为治疗靶点的药物开发提供了科学依据。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7
【部分图文】：

扩增曲线,统计学意义,解曲线,标准偏差

解曲线及扩增曲线，运用 2-ΔΔCT 进行。结果表示为平均值标准偏差GOLPH3 蛋白表达与患者临床变量之间有统计学意义。第二节实验结果肝癌患者中的表达情况研究表达是否与HCC相关，我们首先对60例QPCR 结果显示，HCC 组织中 GOLPH3 m有显著的统计学意义（P <0.01），结床标本中 GOLPH3 mRNA 相对表达量（Normal 1.19 0.72 织组；Cancer：HCC 组织组。与对照组相

临床特征,患者,相关性分析

（10*40 倍）图 1-2 HCC 临床标本中 GOLPH3 蛋白表达量二、GOLPH3 的表达与患者临床特征的相关性分析通过前面的研究发现在大多数 HCC 患者中 GOLPH3 过度表达，那么 GOLPH3 的过

肝癌细胞株,统计学意义,癌细胞株,肝细胞性肝癌

结果表示为平均值标准偏差（验分析 GOLPH3 蛋白表达与患者临床变量之 <0.05 为有统计学意义。第二节实验结果胞株中的表达情况研究们发现 GOLPH3 在大多数肝细胞性肝癌患者中肝癌中的作用，我们首先验证了GOLPH3在肝、MHCC97H 中及正常肝组织中的表达情况。 Bel-7402、QGY-7703、MHCC97L、MHCC97H 差异具有统计学意义（P <0.05）。结果详见癌细胞株中 GOLPH3 mRNA 的相对表达量（ l Bel-7402 QGY-7703 MHCC90.25 1.84 0.11**2.88 0.49**2.11 P <0.05, ** P <0.01, *** P <0.001。

【参考文献】