肺癌放疗抵抗相关长链非编码RNA（LncRNA）表达谱初步筛选及功能研究

发布时间：2020-09-19 16:16

　　 研究背景和目的:放射治疗(放疗)是肺癌局部治疗的有效手段,但放疗抵抗常见,直接影响临床疗效。有文献报道,long non-coding RNAs(Lnc RNAs)在放疗抵抗中起到重要作用。本研究主要探讨Lnc RNAs在肺癌放疗抵抗中的潜在意义。方法:1、构建放疗抵抗肺癌亚系H460R、A549R。应用梯度增加X射线剂量法对H460、A549细胞反复照射,历时6个月,共照射10次,剂量分别为前3次4Gy,中4次6Gy,后3次8Gy,每次照射间隔为1-2周,累积剂量60Gy。照射完成后抵抗株命名为H460R、A549R。2、利用CCK-8法验证细胞的放疗抵抗性。将H460、H460R与A549、A549R细胞铺96孔板,培养12小时后,分别给予0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,12Gy,16Gy X线照射,培养48h后,加入CCK8检测。3、放疗对细胞表型的影响。利用流式细胞术检测细胞周期特征。利用Transwell迁移实验验证细胞的迁移能力。4、筛选出与放疗抵抗相关的Lnc RNAs。应用高通量测序,筛选出H460与H460R差异表达的Lnc RNA,再选出其中一个放疗抵抗Lnc RNA MIR4453,做进一步深入研究。5、MIR4453表达下调后对H460R细胞表型的影响。敲低H460R细胞的Lnc RNA MIR4453,检测对H460R细胞放疗敏感性、周期、凋亡及迁移能力的影响。结果:放疗抵抗细胞株H460R、A549R与亲本细胞株H460、A549相比,显示出明显的放射抵抗性。分别给予2Gy,4Gy,6Gy,8Gy,12Gy,16Gy X线照射,抵抗株较亲本均具有更高的存活率。流式细胞术检测发现,细胞周期发生了相应变化,H460R、A549R细胞的G0/G1期比例较H460、A549细胞减少,而S期、G2/M期比例明显增加。Transwell迁移实验显示,放疗增强H460R细胞的迁移能力。高通量测序检测H460与H460R细胞,共有71个差异表达的Lnc RNA(上调36个,下调35个,p0.05)。选出其中一个放疗抵抗Lnc RNA MIR4453,下调MIR4453后,能增加H460R细胞的放疗敏感性,降低细胞的迁移能力,并对细胞周期、凋亡有一定影响。结论:1、梯度增加X射线剂量法,能成功构建放疗抵抗肺癌细胞株。2、放疗抵抗肺癌细胞株的生物学特征有显著改变。表现为细胞周期G0/G1期比例减少,S期、G2/M期比例增加,及迁移能力提高。再次给予不同剂量的X线照射,放疗抵抗肺癌细胞株较亲本细胞株生存率高。3、与亲本细胞株H460比较,放疗抵抗肺癌细胞株H460R的Lnc RNAs有显著改变。4、Lnc RNA MIR4453是肺癌细胞放疗抵抗相关Lnc RNA之一。其表达水平的改变,会影响肺癌细胞的放疗敏感性及迁移能力。
【学位单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R734.2

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本文编号：2822727