赛伐珠单抗偶联奥沙利铂脂质体制备及对HCC细胞株体外靶向性的研究

发布时间：2020-09-28 19:28

　　 目的:本研究旨在制备抗VEGF单克隆抗体赛伐珠单抗(Sev)修饰奥沙利铂(OXA)脂质体,以提高奥沙利铂(OXA)对肝细胞癌(HCC)细胞的靶向性,达到高效、低毒的抗肿瘤作用,并通过体外细胞MTT和荧光标记脂质体培养细胞实验评价该免疫脂质体对HCC细胞株的细胞增殖抑制作用和靶向性。方法:采用薄膜分散法、逆向蒸发法和逆向蒸发结合冻融法制备免疫脂质体,根据脂质体包封率高低,最终选择逆向蒸发结合冻融法制备免疫脂质体,并考察该方法制备出的免疫脂质体的形态、粒径、包封率、抗体偶联率、抗体活性、体外释药率等性质。以人HCC细胞株Bel7402和HepG2为实验对象,采用MTT实验及细胞摄取荧光标记脂质体实验观察OXA免疫脂质体对细胞的毒性及靶向能力。结果:成功制备OXA免疫脂质体,包封率平均为15.91%,其平均粒径为182.9nm,平均电位为-29.2mV。电镜下观察该免疫脂质体的形态为类圆球形,抗体偶联率为43.76%,活性保持为84.38%,96h后累计释药率为82.34%。MTT细胞毒性实验结果表明该脂质体材料对Bel7402和HepG2细胞没有明显的毒性,OXA免疫脂质体对HCC细胞Bel7402和HepG2的细胞毒性强于普通OXA脂质体及游离OXA。激光共聚焦显微镜观察到HCC细胞Bel7402和HepG2对OXA免疫脂质体的摄取高于普通OXA脂质体。初步判断该OXA免疫脂质体体外对HCC细胞具有一定的靶向性。结论:本研究成功制备出OXA免疫脂质体,该免疫脂质体粒径分布均匀,且抗体活性保持在高水平。该OXA免疫脂质体具有体外主动靶向HCC细胞株Bel7402和HepG2的能力,且能抑制HCC细胞生长,值得进一步深入研究。
【学位单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7
【部分图文】：

介导 HCC 治疗（图 1-1），具体作用为被动靶载体本身可过增强及滞留效应(Enhanced Permeability and Ret利用 Sev 的主动靶向作用，实现药物在肿瘤部位的蓄积，具低全身毒副作用。我们课题组的前期研究结果，本课题拟将长循环脂质体包覆 除率、延长半衰期、维持血药浓度并具有被动靶向性，偶联 本身具有抗肿瘤作用，最终制成的 OXA 免疫脂质体会具有比

2.3.2 色谱条件按“2.2.1.2”色谱条件进行高效液相色谱分析，得到的色谱峰型良好，因此确定本实验所需的色谱条件如下：色谱柱为 HypersiLODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲醇:水=5:95（V/V），流速 1.00 mL/min，检测波长 250nm，柱温 30℃，进样量 20 L。2.3.3 专属性的考察按“2.2.1.2”上述色谱条件进行液相色谱分析，可知杂质峰与主成分峰分离良好，脂质体的辅料对图 2-1 OXA 紫外吸收峰

色谱条件进行高效液相色谱分析，得到的色谱峰型良好，因为 HypersiLODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流动相为甲图 2-1 OXA 紫外吸收峰

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1 吕洋洋;赛伐珠单抗偶联奥沙利铂脂质体制备及对HCC细胞株体外靶向性的研究[D];东南大学;2018年

本文编号：2829168