第一部分阳和汤对阳虚证乳腺癌的抑制作用目的:观察阳和汤对4T1乳腺癌细胞及小鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法:1.体外实验:制备阳和汤含药血清,采用阳和汤含药血清干预4T1乳腺癌细胞,绘制细胞生存曲线,观察阳和汤对4T1乳腺癌细胞的抑制作用。2.体内实验:采用腺嘌呤灌胃法复制阳虚证小鼠模型,并进行模型评价,皮下接种法复制阳虚证乳腺癌荷瘤小鼠模型,采用阳和汤及化疗药物环磷酰胺分组(空白组、阳虚组、单纯荷瘤组、阳虚荷瘤组、阳和汤+单纯荷瘤组、阳和汤+阳虚荷瘤组、阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组)进行干预,干预完成后观察各组小鼠脾重、瘤重及抑瘤率。结果:1.阳和汤含药血清对4T1乳腺癌细胞有明显的的抑制作用且呈时间依赖性;2.阳虚造模完成以后,小鼠出现蜷缩不动、畏寒肢冷、精神萎靡、大便清稀等阳虚表现,T3、T4、ACTH值明显下降,造模成功;3.三个治疗组脾重小于模型组(P0.05),阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组脾重小于另外两个治疗组(P0.05)。与阳虚荷瘤组比较,阳和汤+阳虚荷瘤组瘤重仅为其瘤重的1/2(P0.05),且抑瘤率为52.87%,高于阳和汤+单纯荷瘤组的37.58%。结论:阳和汤对4T1乳腺癌细胞及阳虚证小鼠皮下移植瘤都表现出良好的抑制作用。第二部分阳和汤抗阳虚证乳腺癌的相关机制目的:探讨阳和汤抗阳虚证乳腺癌的相关机制方法:1.阳和汤含药血清干预4T1乳腺癌细胞72小时后,收集细胞上清液,ELISA检测VEGF、PGE2;2.将70只BABL/c小鼠分为7组,每组10只,分别为空白组、阳虚组、单纯荷瘤组、阳虚荷瘤组、阳和汤+单纯荷瘤组、阳和汤+阳虚荷瘤组、阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组,阳和汤及化疗药物环磷酰胺分组进行干预后,流式细胞术检测小鼠脾脏中MDSC、NKT细胞及T细胞亚群的含量,RT-PCR检测脾脏中i NOS、ARG-1的表达,二氢乙锭荧光探针(DHE)检测ROS表达,Western bolt检测STAT1、p-STAT1、STAT3、p-STAT3的表达;采外周血ELISA法检测IL-6、TGF-β、IFN-γ的表达。结果:1.MDSC、NKT细胞含量各治疗组均低于阳虚荷瘤组(P0.01),治疗组之间比较无意义(P0.05),治疗组CD3+CD4+T细胞含量提升明显(39.75%,42.84%,39.95%),与阳虚荷瘤组比较有意义(P0.01),CD3+CD8+T细胞含量变化不明显(P0.05)。2.IFN-γ表达治疗组明显上调,阳和汤+阳虚荷瘤组、阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组是阳虚荷瘤组的2倍(P0.01),阳和汤+阳虚荷瘤组(993.06±59.93pg/ml)高于阳和汤+单纯荷瘤组(820.93±138.24pg/ml)且有统计学意义(P0.05),IL-6、TGF-β治疗组均低于阳虚荷瘤组(P0.05或P0.01)。3.i NOS、ROS表达阳和汤+单纯荷瘤组与阳虚荷瘤组比较无意义(P0.05),ARG-1三个治疗组与阳虚荷瘤组比较有显著统计学意义(P0.01)。所有治疗组之间比较无意义(P0.05)。4.p-STAT1/STAT1表达三个治疗组上调明显,与阳虚荷瘤组比较均有统计学意义(P0.05或P0.01)。阳和汤+阳虚荷瘤组(0.85±0.04)高于阳和汤+单纯荷瘤组(0.54±0.05),有统计学意义(P0.05)。p-STAT3/STAT3表达三个治疗组均下调,与阳虚荷瘤组比较均有显著统计学意义(P0.01)。治疗组之间比较无意义(P0.05)。结论:1.阳和汤含药血清能有效抑制4T1乳腺癌细胞的增殖。2.阳和汤通过抑制MDSC的生成和激活发挥抗肿瘤作用。主要机制为下调VEGF、PGE2、IL-6、TGF-β等细胞因子的表达,从而使STAT3信号通路失活。同时也能下调MDSC下游产物i NOS、ARG-1、ROS的表达,使MDSC失去免疫抑制功能。3.阳和汤通过上调IFN-γ的表达激活STAT1,增强机体免疫应答能力,也能通过上调CD3+CD4+T淋巴细胞的表达,重塑免疫功能。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.9
【部分图文】：
实验结果表明，经阳和汤含药血清处理后的4T1乳腺癌细胞增殖受到明显抑制，且呈时间依赖性，与空白组比较有统计学意义（P＜0.05）。临床等效剂量组与2倍等效剂量组之间比较无统计学意义（P＞0.05）。见表1.1、图1.1。表1.1 阳和汤对4T1乳腺癌腺癌细胞的抑制率（%） (x s)组别 24h 48h 72hNS 组 —— —— ——LYH 组 27.54 2.79* 30.11 2.51* 37.75 1.18*HYH 组 24.65 2.59* 28.30 2.37* 37.37 2.22*CTX 组 39.83 3.72* 45.07 4.83* 50.04 3.76*注：与 NS 组比较，*P＜0.05图1.1 抑制率（%）注：与 NS 组比较，*P＜0.054 小结阳和汤含药血清对 4T1 乳腺癌细胞存在明显的抑制作用， 且呈时间依赖性。
组内不同时间体重对比，差异无显著性（P＞0.05）。阳虚组造模第21d、第28d与空白对照组同期比较，低于空白对照组，且有显著差异（P＜0.05）。结果见表1.4 及图1.2。
图 1.3 各组小鼠脾重（g）：1.空白组；2.单纯阳虚组；3.单纯荷瘤组；4.阳虚荷瘤组；5.阳和汤+单纯荷瘤组；6.和汤+阳虚荷瘤组；7. 阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组。与空白组比较，▲P＜0.05；与阳虚荷瘤比较，*P＜0.05；与阳和汤+CTX+阳虚荷瘤组比较，#P＜0.05
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本文编号：
2829213
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