DAP1调控肺癌细胞凋亡的作用机制研究

发布时间：2020-09-29 10:04

　　 DAP1(死亡相关蛋白1)是进化上高度保守的蛋白,分子量为15kD,先前的研究表明,DAP1在细胞凋亡中发挥着重要的作用,并且DAP1 一度被认为是衡量肿瘤患者预后水平的标准之一。但DAP1对细胞凋亡的调控及其分子机制尚不清楚,因此我们的目的是探究DAP1在肺癌细胞凋亡中的作用及调控的分子机制。这将为临床上肺癌的治疗提供理论依据和新的治疗靶点,并且为其他癌症的治疗提供很好的借鉴作用。首先,当我们用doxorubicin和pemetrexed等化疗药物诱导肺癌细胞凋亡时,发现DAP1的蛋白水平受化疗药物诱导,并且呈现剂量和时间依赖效应。当我们敲低DAP1后,蛋白免疫印迹实验和流式细胞术结果均表明,doxorubicin和pemetrexed诱导的细胞凋亡减弱;而过表达DAP1会增强这两种药物诱导的细胞凋亡,这说明DAP1能促进肺癌细胞凋亡。由于很多化疗药物可以通过内质网应激反应诱导细胞凋亡,我们通过对内质网应激感受器蛋白的检测,发现DAP1可以明显调控EIF2AK3,当敲低DDAP1后可以明显下调EIF2AK3-DDIT3信号通路;过表达DDAP1后则可以显著增强EIF2AK3-DDIT3信号通路,这说明DAP1可以通过EIF2AK3促进内质网应激。为了探究DAP1诱导的细胞凋亡和内质网应激之间是否相关,我们检测了内质网应激相关蛋白EIF2AK3、DDIT3以及凋亡相关蛋白TNFRSF10B、CASP8、CASP3和PARP-1,发现DAP1可以同时诱导内质网应激和细胞凋亡;过表达DAP1的同时敲低EIF2AK3,发现过表达DAP1对细胞凋亡无明显效应。以上实验数据表明,DAP1可以通过EIF2AK3-DDIT3诱导内质网应激,而DDIT3通过TNFRSF10B介导外源性细胞凋亡。随后,我们通过免疫共沉淀实验发现DAP1与SETDB1存在相互作用,并且DAP1对EIF2AK3的调控依赖于SETDB1。RT-PCR和EIF2AK3启动子活性分析表明,DAP1对EIF2AK3的调控主要发生在转录水平。综上所述,我们提出DAP1调控肺癌细胞凋亡的作用机制:即DAP1与组蛋白甲基转移酶SETDB1结合,促进组蛋白H3K4三甲基化,增强EIF2AK3转录,进而通过EIF2AK3-DDIT3诱导内质网应激反应,而DDIT3通过促进死亡受体TNFRSF10B的转录诱导外源性细胞凋亡。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R734.2
【部分图文】：

细胞内源和外源性凋亡信号通路模式图

图２邋ＵＰＲ信号通路模式图逡逑ＥＲ邋ｓｔｒｅｓｓ介导的信号通路可以景多响细胞的命运、癌症进展以及肿瘤抑制，逡逑如何根据这些信号通路的特点寻找有效的靶点进行介入治疗是目前生物学上比逡逑

DAPl抑制自噬

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本文编号：2829581