SOD3高表达对MGC803细胞生长增殖的影响

发布时间：2020-10-12 20:51

　　 目的:本文明确SOD3蛋白在胃癌细胞增殖中的作用及机制,为阐明胃癌发病的分子机制提供依据。方法:1、将pCDNA3.1-SOD3真核表达载体转染胃癌MGC803细胞(pCDNA3.1为载体对照),G418筛选后,建立SOD3稳定高表达的MGC803细胞系,即MGC803-SOD3细胞(MGC803-pCDNA3.1为载体对照细胞),通过免疫荧光与Western-blot检测MGC803-SOD3细胞中SOD3的表达。2、采用细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪观察SOD3高表达对MGC803细胞生长与增殖的影响。3、Western-blot检测MGC803-SOD3细胞中JAK3、STAT3及其磷酸化蛋白表达。结果:1.细胞生长曲线结果显示,SOD3高表达后,MGC803-SOD3细胞的生长较对照组MGC803与MGC803-pCDNA3.1细胞明显减慢(P0.01);2、平皿克隆结果显示,MGC803、MGC803-pCDNA3.1与MGC803-SOD3细胞的克隆数分别为262.32±29.34、250.43±27.26和86.52±12.43(个)。结果说明SOD3高表达后,MGC803细胞增殖能力降低,形成克隆数较对照组MGC803与MGC803-pCDNA3.1细胞明显减少,克隆体积变小(P0.01);3、软琼脂集落结果显示,MGC803、MGC803-pCDNA3.1与MGC803-SOD3细胞的集落分别为326.42±35.24、314.13±32.25和128.21±21.42(个),结果同样说明SOD3高表达后,MGC803细胞增殖能力也降低,形成集落数较对照组MGC803与MGC803-pCDNA3.1细胞明显减少,集落体积也变小(P0.01);4、流式细胞仪结果显示,MGC803、MGC803-pCDNA3.1与MGC803-SOD3细胞S期比例分别为46.26±2.38、42.34±2.45和31.26±2.34,G1期比例分别为46.12±2.52、8.22±2.64和61.73±3.12,细胞增殖指数分别为53.88、51.77和38.27;结果说明SOD3高表达后,MGC803细胞中S期比例降低,G1期比例增加,且细胞增殖指数降低(P0.01);同时,MGC803、MGC803-pCDNA3.1与MGC803-SOD3细胞的凋亡率分别为9.67±1.24、10.02±1.32和28.95±3.26,结果说明SOD3高表达后,MGC803细胞的凋亡率增加(P0.01)。5、Western-blot结果显示:MGC803-SOD3细胞中JAK3、STAT3蛋白表达无明显差异,但两蛋白的磷酸化水平较对照组MGC803、与MGC803-pCDNA3.1细胞降低(P0.01)。结论:SOD3降低细胞生长增殖能力,促进MGC803细胞凋亡,可能与其抑制JAK3-STAT3通路活化有关。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.2
【部分图文】：

图 3-1 MGC803-SOD3 细胞中 SOD3 蛋白表达的鉴定03-pcDNA3.1 和 MGC803-SOD3 细胞的克隆图（×10）。光观察 MGC803-SOD3 细胞中 SOD3 蛋白的表达（×40）。n-blot 检测 MGC803-SOD3 细胞中 SOD3 蛋白的表达。白表达的灰度分析直方图。*与MGC803和MGC803-pcDNA3.1细胞3 高表达对 MGC803 细胞生长的影响态良好的 MGC803、MGC803-pcDNA3.1 和 MGC803-SOD3 细孔板中，每天对三组细胞采用 MTT 法检测每孔细胞的吸光度值，连续检测 7 天，将检测结果连接成的细胞生长曲线。细胞，MGC803-SOD3 细胞的生长速度较 MGC803 和 MGC803减慢（如图 3-2，P<0.01）。结果说明 SOD3 高表达后 MGC

图 3-2 MGC803、MGC803-pcDNA3.1 和 MGC803-SOD3 细胞的生长曲线*与 MGC803 和 MGC803-pcDNA3.1 细胞比较，P<0.01。D3 高表达对 MGC803 细胞克隆形成的影响态良好的MGC803、MGC803-pcDNA3.1和MGC803-SOD3细胞每组均设3个平行孔，观察SOD3高表达对MGC803克隆形成的 数 及 克 隆 形 成 率 。 结 果 显 示 ， MGC803 、 MGC803-pcD-SOD3细胞克隆数分别为262.32±29.34、250.43±27.26和86MGC803-SOD3细胞形成的克隆体积小，克隆数目少，其克隆GC803和MGC803-pcDNA3.1细胞（如图3-3和表3-1，P<0.01）3高表达后MGC803细胞的增殖能力降低。

MGC803-SOD3细胞克隆数分别为262.32±29.34、250.43±27.26和86.52±12.43（个），MGC803-SOD3细胞形成的克隆体积小，克隆数目少，其克隆形成率明显低于MGC803和MGC803-pcDNA3.1细胞（如图3-3和表3-1，P<0.01）。结果说明，SOD3高表达后MGC803细胞的增殖能力降低。AMGC803细胞MGC803-pcDNA3.1 细胞Days****相对吸光值
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本文编号：2838261