沉默TGM2表达对MGC803细胞生长与增殖的影响

发布时间：2020-10-16 16:54

　　 目的:胃癌是严重威胁人们健康与生命的常见恶性肿瘤。为了解其发病机制,课题组前期采用定量蛋白质组学技术,从胃粘膜癌变不同阶段筛选获得了组织型转谷氨酰胺酶(Tissue Transglutaminase,TGM2)蛋白,进一步了解该蛋白在胃癌发生发展中的作用机制,可为阐明胃癌发病的分子机制提供实验资料。方法:1、构建TGM2干扰质粒,转染MGC803细胞,筛选后建立沉默TGM2表达MGC803细胞系;2、采用Western-blot与细胞免疫荧光方法检测MGC803细胞中TGM2蛋白的表达;3、运用细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪等,观察沉默TGM2表达对MGC803细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响。结果:1、构建了pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2干扰质粒。2、细胞生长曲线结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞的生长速度较对照组MGC803与MGC803-pcDNA6.2细胞明显减慢,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞生长与增殖受到抑制(P0.01);3、平皿克隆形成实验结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞与对照组MGC803和MGC803-pcDNA6.2细胞的克隆数分别为96±12、282±25和294±38(个),MGC803-Sin-TGM2细胞形成克隆数目较对照组明显减少,且克隆体积小,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞的克隆形成能力明显降低(P0.01);4、软琼脂集落形成实验结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞与对照组MGC803和MGC803-pcDNA6.2细胞的集落数分别为124±35、542±54和568±66(个),MGC803-Sin-TGM2细胞形成的集落较对照组明显减少,且克隆体积小,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞的集落形成能力明显降低(P0.01);5、流式细胞仪检测结果显示:MGC803-Sin-TGM2细胞S期(%)细胞比为15.77±2.14,G1期(%)细胞比为82.96±6.46,细胞增殖指数为17.05;MGC803细胞S期(%)细胞比为42.15±3.24,G1期(%)细胞比为45.41±2.42,细胞增殖指数为54.60;而MGC803-pcDNA6.2细胞S期(%)细胞比为38.95±3.25,G1期(%)细胞比为46.58±2.56,细胞增殖指数为53.42,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞中S期细胞比例明显减少,G1细胞比例增加,细胞增殖指数降低(P0.01);同时,MGC803-Sin-TGM2、MGC803与MGC803-pcDNA6.2细胞的凋亡率降分别为35.94±3.45、18.28±2.56与12.84±2.13,结果说明MGC803细胞中沉默TGM2表达后,细胞的凋亡率增加(P0.01)。结论:沉默TGM2表达,MGC803细胞增殖指数降低,细胞凋亡增加,细胞生长与增殖抑制。
【学位单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.2
【部分图文】：

图 4-1 pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2 质粒的测序鉴定A：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-1部分测序图。B：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-2部分测序图。C：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-3部分测序图。

C803-Sin-TGM2 细胞中 TGM2 蛋白表达的鉴定 MGC803-Sin-TGM2 细胞的克隆图。A6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2 在 MGC803 细胞中的干扰W/EmGFP-Sin 细胞比较，P<0.01。

图 4-3 MGC803-Sin-TGM2 细胞的生长曲线*与 MGC803 和 MGC803-pcDNA6.2 细胞比较，P<0.01。实验检测沉默 TGM2 表达对 MGC803 细胞
【参考文献】

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1 张志伟;胃粘膜上皮癌变相关蛋白质分子的筛选与鉴定[D];南华大学;2015年

本文编号：2843520