SIRT2抑制剂对THP-1白血病细胞生物学行为的影响及机制探索

发布时间：2020-10-22 21:47

　　 目的探究SIRT2基因对人急性单核细胞白血病细胞株THP-1白血病细胞的细胞周期、增殖、凋亡的影响,以及可能的分子机制,为寻求新的治疗靶向位点提供理论依据。方法将体外培养的THP-1细胞分为2组:实验组和对照组,实验组依据BML266的不同浓度可分为5个亚组2UM、3UM、4UM、5UM、6UM。(1)采用CCK-8法以及流式细胞术分别绘制各组细胞的生长曲线和检测实验组与对照组细胞凋亡、细胞周期。(2)应用qRT-PCR法检测实验组中“最佳浓度”细胞组中相关基因mRNA表达情况:caspase3、caspase7、caspase9、Bcl2、Bax、p21、p53、cyclinD1、NF-κB、c-myc、G-CSFR、G-CSF。(3)应用Western-blot法检测实验组中“最佳浓度”细胞组中p21的蛋白质表达情况。结果(1)当BML266浓度低于4UM时,实验组较对照组生长曲线无显著差异。(2)BML266可抑制THP-1细胞增殖,当给予4UM、5UM、6UM的BML266刺激THP-1细胞时,G2-M/G0-G1期比例显著下调(P0.05)。(3)当给予4UM、5UM、6UM BML266刺激的THP-1细胞,细胞凋亡率均显著高于对照组(P值均为0.05)。(4)给予4UM BML266刺激的THP-1细胞实验组,G-CSFR的mRNA表达显著下调(P0.05)。(5)予4UM BML266刺激的THP-1细胞实验组,原癌基因NF-κB的mRNA表达显著下调(P0.05)。(6)给予4UM BML266刺激的THP-1细胞实验组,p21、p53及促凋亡基因Bax的mRNA表达显著上调(P值均0.05)。(7)给予4UM BML266刺激的THP-1细胞实验组相较于对照组p21的蛋白质水平升高(P值0.05)。(8)THP-1细胞在给予4UM BML266后,可抑制其生长、并诱导细胞凋亡,但该浓度对HEK293T细胞的生长无明显影响。结论(1)SIRT2特异性抑制剂BML266可能通过影响G-CSFR、NF-κB、p21、p53、Bax等基因的表达,诱导G2-M/G0-G1期比例显著下调,抑制THP-1白血病细胞的增殖。(2)SIRT2可以通过细胞外调节p53信号通路对THP-1白血病细胞的周期、凋亡进行调控。(3)BML-266可抑制THP-1白血病细胞增殖,可能与p21蛋白的活化相关。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R733.7
【部分图文】：

IRT2 抑制剂对 THP-1 白血病细胞生物学行为的影响及机制探索 2018 届硕士学.8.6 荧光实时定量 PCR 反应1) 引物混合物的配制：依次加入上游引物 10μl，下游引物 10μl，Rnawater 80μl，充分混匀；2) 反应体系的配制：qPCR 反应体系配制方案及 qPCR 反应条件分别2-4 及图 2-1，2-2，2-3：表 2-4 qPCR 反应体系配制方案

图 2-1：Bcl2、caspase9、G-CSF、G-CSFR、p21、p53 基因 qPCR 反应条件Figure2-1: qPCR reaction conditions for Bcl2, caspase9, G-CSF, G-CSFR, p21 and p53 genes

图 2-3：c-myc、cyclinD1 基因 qPCR 反应条件Figure2-3: qPCR reaction conditions for c-myc, cyclinD1 genes2.8.7 实时定量 PCR 产物定量分析采用相对定量△△CT 法计算 mRNA 的相对表达量，按以下计算公式计算:a. 相对表达倍数=2—△△CTb. △CT=CT 靶基因—CT 内参c. △△CT=△Ct 样品—△Ct 校正品2.9 Western-blot 检测靶基因蛋白质的表达2.9.1 细胞总蛋白的提取(1) 加入 RIPA 裂解液、PMSF；(2) PBS 缓冲液洗涤细胞 1 次，弃上清后加入 RIPA 裂解液 200ul，吹打数
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本文编号：2852135