人参皂苷Rh1通过DDX5抑制HER2阳性乳腺癌细胞恶性生物学行为的研究

发布时间：2020-10-22 08:58

　　 目的:本研究旨在细胞水平及分子水平探究人参皂苷Rh1对HER2阳性乳腺癌细胞(SKBR3细胞)的影响。1.探讨人参皂苷Rh1对乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为和DDX5表达的影响。2.检测DDX5在乳腺癌组织中的表达水平及DDX5与临床分期、病理分级等临床病理特征的关系。方法:1.采用MTS实验检测不同浓度人参皂苷Rh1(0、10、50、100、500,uMol)对乳腺癌SKBR3细胞增殖的影响,选择有意义的药物浓度及作用时间。2.采用划痕实验观察人参皂苷Rh1在24h、48h时对乳腺癌SKBR3细胞迁移能力的影响。3.采用Transwell侵袭实验观察人参皂苷Rh1在24h时对乳腺癌SKBR3细胞侵袭能力的影响。4.采用流式细胞术检测实验观察人参皂苷Rh1在48h时对乳腺癌SKBR3细胞凋亡能力和细胞周期的影响。5.采用免疫印迹法(Western-Blot)检测人参皂苷Rh1在48h对乳腺癌SKBR3细胞DDX5蛋白表达的影响。6.采用实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)检测人参皂苷Rh1在48h对乳腺癌SKBR3细胞DDX5基因表达的影响。7.收集并筛选出2014年12月1日-2017年12月31日间沈阳军区总医院存档的术前未经放化疗、中药及其他治疗并带有详细病理资料及其癌组织蜡块标本的98例乳腺癌术后患者,其中HER2过表达型(经Fish检测HER2扩增)乳腺癌患者35例,HER2阴性(HER2阴或1+或经Fish检测阴性的2+)乳腺癌63例。通过免疫组织化学法检测乳腺癌组织中DDX5的表达,结合临床病理资料,观察并统计分析DDX5与临床分期、病理分级等临床病理特征的关系。结果:1.人参皂苷Rh1对HER2阳性乳腺癌细胞生长的影响(1)MTS实验结果发现500uMol人参皂苷Rh1在24h、48h时对HER2阳性人乳腺癌细胞(SKBR3细胞)增殖的抑制有统计学意义,其抑制率分别为18.6%与32.8%。人参皂苷Rh1粉末用二甲基亚砜(DMSO)溶解,遂将以下实验分为3组:空白对照组,DMSO组,人参皂苷Rh1组。(2)流式细胞术检测结果发现人参皂苷Rh1可以诱导SKBR3细胞的凋亡,并且可以使SKBR3细胞阻滞于S期。2.人参皂苷Rh1对HER2阳性乳腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响(1)划痕实验结果发现人参皂苷Rh1干预24h、48h后SKBR3细胞迁移能力明显减弱。(2)Transwell侵袭实验结果发现人参皂苷Rh1干预24h后SKBR3细胞侵袭能力明显减弱。3.人参皂苷Rh1对HER2阳性乳腺癌细胞中DDX5表达的影响(1)免疫印迹法(Western-blot)检测结果提示500uMol人参皂苷Rh1作用48h可减弱乳腺癌SKBR3细胞DDX5蛋白表达。(2)Rt-PCR检测结果提示500uMol人参皂苷Rh1在48h对乳腺癌SKBR3细胞中DDX5基因的表达未有抑制作用。4.通过对带有详细临床分期和病理资料的乳腺癌组织切片进行DDX5的免疫组化染色并评分,统计分析得出相比HER2阴性乳腺癌,DDX5蛋白在HER2阳性乳腺癌组织中表达较高;且DDX5蛋白表达高的乳腺癌患者临床分期较晚、病理分级较差。结论:本课题研究发现人参皂苷Rh1可抑制SKBR3细胞的增殖、诱导SKBR3细胞的凋亡、使其阻滞于S期;可以抑制SKBR3细胞的迁移、侵袭能力;可以抑制SKBR3细胞中DDX5蛋白的表达,而未抑制DDX5基因的扩增。免疫组织化学染色结果提示DDX5在HER2阳性乳腺癌组织中高表达,且与乳腺癌病理分级、临床分期有一定的相关性,DDX5高表达的患者病理分级较差、临床分期较晚。DDX5可能有望成为判断乳腺癌不良预后的标记物和潜在临床治疗靶点。人参皂苷Rh1可能通过抑制DDX5转录后的程序从而抑制DDX5蛋白表达进而影响乳腺癌SKBR3细胞的恶性生物学行为。
【学位单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.9
【部分图文】：

：不同浓度人参皂苷 Rh1 在不同时间点对 SKBR3 细胞的05，—X表示均值，S 表示标准差，细胞成活率=（用药组验提示 500uMol 的人参皂苷 Rh1 可以抑制 SKB记录空白对照组、DMSO 组以及人参皂苷 Rh1 组4h、48h 细胞划痕损伤修复情况，观察到用药组。运用 ImageJ 软件计算各组各时间段迁移面积（0h 平均区域面积-24h 或 48h 平均区域面积）软件处理数据，绘图（图 2），结果显示：500u

- 21 -图 2 人参皂苷 Rh1 对 SKBR3 细胞迁移能力的影响验提示 500uMol 的人参皂苷 Rh1 可以抑制 SKBR3 细SO 组以及人参皂苷 Rh1 组干预 24h 后，行 Transwel袭数目计算平均值，运用统计学软件处理数据并绘参皂苷 Rh1 组与其他两组比较 SKBR3 细胞穿过基底膜义（P 值<0.05）。

人参皂苷Rh1对SKBR3细胞侵袭能力的影响
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本文编号：2851387