电离辐射联合EGFR抑制剂增强NK细胞对口腔鳞癌细胞的杀伤作用和机制研究

发布时间：2020-10-23 13:33

　　 研究目的肿瘤是一种免疫疾病,改善和提高患者免疫力是肿瘤治疗的重要方向。多数肿瘤患者NK细胞数目减少,NK细胞是非特异性免疫应答的核心细胞,NK细胞表面的NKG2D配体通路在抗肿瘤免疫应答中发挥着重要的作用。放射治疗中产生的电离辐射对NK细胞的杀伤能力的影响和机制尚不清楚。EGFR抑制剂(西妥昔单抗)对口腔鳞癌患者免疫功能的研究也较少。本研究通过探讨电离辐射和EGFR抑制剂(西妥昔单抗)对口腔鳞癌细胞系SCC25表面NKG2D配体表达的影响,为口腔鳞癌的放疗联合EGFR抑制剂增强NK细胞治疗提供实验支持。研究方法1.流式细胞术检测临床患者放疗前后外周血淋巴细胞各亚型数目变化,CCK8试剂盒检测NK细胞的杀伤能力跟NK细胞比例的关系。2.PCR技术检测SCC25电离辐射前后24h NKG2D配体m RNA的表达情况;流式细胞术检测EGFR抑制剂处理后肿瘤细胞表面NKG2D配体的变化。3.CCK8试剂盒和LDH乳酸脱氢酶释放实验检测电离辐射和EGFR抑制剂处理后NK细胞对SCC25的杀伤能力。研究结果1.临床口腔肿瘤患者放疗后外周血NK细胞在放疗后外周血中的比例是增高的。CCK8实验显示NK细胞可以显著杀伤SCC25,且NK细胞比例越高,对SCC25杀伤作用就越强。2.SCC25接受2Gy电离辐射后,NKG2D配体m RNA表达量有不同程度的增加,其中MICB表达量增加显著,且在一定时间内达高峰。3.NK细胞与EGFR抑制剂均可以显著杀伤SCC25;电离辐射、EGFR抑制剂和NK细胞三者共同作用时,对SCC25的杀伤作用最为显著。研究结论1.患者放疗后外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞等数目均下降且比例降低,可NK细胞在放疗后外周血中的比例是增高的;NK细胞比例越高,对肿瘤细胞杀伤能力越强。2.电离辐射和EGFR抑制剂均能使SCC25表面NKG2D配体表达量有所增加。3.电离辐射、EGFR抑制剂和NK细胞三者共同作用时,对SCC25的杀伤作用最为显著。4.电离辐射联合EGFR抑制剂可能通过提高肿瘤细胞表面的NKG2D配体表达,从而增强NK细胞对口腔鳞癌细胞的杀伤作用。
【学位单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.8
【部分图文】：

图 1．NKG2D 受体与衔接分子结合并通过白细胞表达[31]re1.NKG2D receptor association with adaptor molecules and expressionby leukocytes[31]体的结构和种类鼠 NKG2D 配体是 MHC I 类分子的结构同系物。人类确定的 。所有的配体包括两个胞外结构域，与 MHC I 类蛋白的αMICA 和 MICB 包含除了α1 和α2 领域之外，还有一个α3基 MIC 基因具有高度多态性[16]。MICA 只有 15-40%的氨基酸在 MHC 位点上编码[17]。因此，由于连锁不平衡，MICA 等位基型 HLA 结合。与 MHC 基因的高度多态性相似，MICA 和 MIC0 个等位基因[16-18]。这些等位基因的变异体与 NKG2D 以不同的 NK 细胞触发和 T 细胞激活的阈值。体亲和力对不同分子表现不同。NKG2D 所有配体的亲和力约

图 2. 通过癌症治疗和免疫疗法诱导 NKG2D 配体表达[31]ion of NKG2D ligand expression by cancer treatments andimmutargeting these ligands[31] NKG2D 配体肿瘤治疗的研究调表达肿瘤，基质和血管内皮细胞的免疫调节表面分附分子、死亡受体，热休克蛋白）和分泌性分子（细有免疫调节活性。Ishikawa 等人证实，在自体模型可以增强杀伤细胞介导的细胞毒性作用。这种作用可导 NKG2D 配体的表达。Joo-Young Kim 等人研究了四辐射下，NKG2D 配体（MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、表明高温和电离辐射可以诱导 NKG2D 配体，从而可[46]

上海交通大学硕士学位论文统计学意义（P<0.01）；CD8+T 细胞放疗后在外周血中的百分率也增高且差异有统计学意义（P<0.01）；CD3+T 细胞放疗后百分率升高，但无统计学上的意义（P>0.05），CD4+T 细胞百分率、B 淋巴细胞百分率及 CD4+/CD8+T 细胞比值在放疗后有明显的下降，且差别有统计学意义（P<0.01）（表 2）。
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本文编号：2853105