玻璃化冻存切片培养在转移性肝癌药敏实验中的应用

发布时间：2020-11-03 05:28

　　 目的:探讨玻璃化冻存活检肿瘤组织的可行性和有效性,尝试基于薄层切片体外培养技术建立一种全新高效的体外抗肿瘤药敏实验模型。方法:从仁济医院肿瘤介入科获取直肠癌肝转移活检组织,并作玻璃化冻存处理,复苏后组织用于建立直肠癌肝转移人源性移植瘤模型。将移植瘤切割成300μm厚度切片,嵌取直径2mm的组织圆片。组织圆片于Transwell表面培养24小时后,向培养液中分别添加抗肿瘤药物奥沙利铂(20μM)和瑞格菲尼(20μM),充分反应72小时。利用复苏后组织建立人源性移植瘤模型,分别腹腔注射200μl抗肿瘤药物奥沙利铂(5mg/kg)和瑞格菲尼(30mg/kg)。通过CCK-8实验和Calcein-AM活细胞染色/Hoechst33342染色实验检测细胞生物学活性变化;通过苏木紫伊红染色实验检测组织学结构变化;通过免疫组化实验检测细胞增殖与凋亡情况。结果:玻璃化冻存法可以有效保持直肠癌肝转移活检组织的生物学活性,体外薄层切片培养技术可以高度保留原始肿瘤的三维结构和组织异质性。新鲜的肿瘤活检组织和复苏后活检组织均可建立人源性移植瘤模型,且体内外药敏反应结果具有一致性。结论:直肠癌肝转移活检肿瘤组织可以被有效冻存,其生物学活性和组织学特征得以高度保留,复苏组织薄层切片可以作为一种新型的、高效的体外药敏实验模型。
【学位单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.7
【文章目录】：
摘要
英文摘要
符号及缩略词说明
1 绪论
2 材料与方法
    2.1 主要仪器和器械
    2.2 实验药品
    2.3 实验动物
    2.4 实验方法
        2.4.1 活检组织的收集与处理
        2.4.2 冻存和复苏操作流程
        2.4.3 组织薄层切片的制备和体外培养
        2.4.4 PDX 的建立
        2.4.5 CCK-8 实验
        2.4.6 Calcein 细胞活力测定及 Hoechst 33342 染色实验
        2.4.7 H&E染色
        2.4.8 IHC染色
        2.4.9 统计与分析
3 结果
    3.1 玻璃化冻存法可保留活检肿瘤组织的生物学特性
    3.2 薄层切片可保留原始肿瘤完整的三维结构和组织异质性
    3.3 PDX 模型的体内药敏反应与体外薄层切片培养具有一致性
4 讨论
5 结论
参考文献
致谢
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本文编号：2868159