白介素-9促进人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长及其机制研究
发布时间：2020-11-16 06:30
目的白细胞介素-9(IL-9)是机体重要的免疫因子,参与不同肿瘤的发生发展,而其在胰腺癌的生物学效应尚未清楚,本研究旨在初步探索IL-9对人胰腺癌裸鼠移植瘤的作用及其机制。方法应用人胰腺癌细胞株PANC-1建立裸鼠皮下移植瘤模型。接种一周左右,移植瘤长至约50-100mm~3,应用随机数字表法将64只裸鼠均分成4组(16只/组),对照组予瘤内注射生理盐水0.1 mL,低剂量组、中剂量组和高剂量组分别予瘤内注射90 ng、180 ng、360 ng IL-9,各组均隔天干预1次,共注射8次。末次用药3日后,各组随机处死8只裸鼠,取各组移植瘤组织并测量重量。采用RT-PCR法检测IL-9R、JAK1、JAK3和STAT3mRNA表达。采用免疫组织化学染色法检测瘤组织中STAT3、pSTAT3、Cyclin D1和Bcl-2蛋白的表达。蛋白质印迹法检测瘤组织中STAT3、pSTAT3的表达。其余小鼠用于观察生存时间。结果低剂量组、中剂量组和高剂量组移植瘤的平均重量分别为(216.01±37.15)mg、(261.63±39.85)mg和(323.12±46.71)mg,明显高于对照组移植瘤的重量(196.75±25.32)mg,中、高剂量组与对照组相比差异均具有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,IL-9干预后裸鼠的生存期缩短,高剂量组的平均生存时间显著降低(P0.05)。RT-PCR法显示各组移植瘤IL-9R、JAK1、JAK3和STAT3 mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05)。各组蛋白质印迹法和免疫组化染色法检测结果显示,与对照组相比,IL-9干预后瘤组织内STAT3表达水平未见明显改变,而中、高剂量组pSTAT3表达水平显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色结果还表明,在不同剂量IL-9干预后的瘤组织中,与对照组相比Bcl-2表达无明显变化(P0.05),Cyclin D1表达升高,组间差异有统计学意义(P0.05)。结论IL-9能明显促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长,同时降低裸鼠的生存时间,该作用可能是通过激活STAT3磷酸化实现的。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.9
【部分图文】：
图 1 IL-9 促进人胰腺癌移植瘤的生长注: control.对照组；IL-9(90ng).低剂量组；IL-9(180ng).中剂量组；IL-9(360ng).高剂量组；A. 各组人胰腺癌移植瘤生长曲线：与对照组相比，低、中、高剂量 IL-9 干预后促进移植瘤生长（P<0.05）；B. 各组人胰腺癌移植瘤的重量：中、高剂量组移植瘤平均重量显著高于对照组（P<0.05）。*P < 0.05 ，与对照组比较。Fig.1 IL-9 promotes the growth of human pancreatic cancer xenografts.Note：control；IL-9(90ng)；IL-9(180ng)；IL-9(360ng).A. Xenografts in group of IL-9 interventionaccelerate growth growth compared with control . B.The weight of tumor in the moderate-dose andhigh-dose group was the most obvious higher as compared to the control group (P<0.05).2. IL-9 干预对移植瘤 IL-9R、JAK1、JAK3、STAT3 mRNA 表达的影响为了研究 IL-9/IL-9R/STAT3 通路是否是 IL-9 对人胰腺癌移植瘤作用的潜在机制。本实验采用 RT-PCR 法分别对各组移植瘤中 IL-9R、JAK1、JAK3、
图 2 各组移植瘤 IL-9R、JAK1、JAK3 和 STAT3 mRNA 表达注: control.对照组；IL-9(90ng).低剂量组；IL-9(180ng).中剂量组；IL-9(360ng).高剂量组； A. IL-9RmRNA 水平 B. JAK1 mRNA 水平 C. JAK1 mRNA 水平 D. JAK3 mRNA 水平 ；不同剂量 IL-9 干预后各组移植瘤中 IL-9R、JAK1、JAK3、STAT3 mRNA 水平无明显改变（P > 0.05）。Fig.2 The relative expression of IL-9R,JAK1,JAK3 and STAT3 mRNANote：There was no significant difference in expression of IL-9R,JAK1,JAK3 and STAT3 mRNA ingroups(P>0.05).3. IL-9 干预对移植瘤 STAT3、pSTAT3 蛋白表达的影响Western blot结果显示，与对照组相比，应用不同剂量IL-9干预后STAT3蛋白表达无明显改变（P>0.05），而 pSTAT3 蛋白表达升高（P<0.05），以中、高剂量组较为显著，且组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。图 3
图 3 Western blot 法检测 STAT3 和 pSTAT3 在各组人胰腺癌移植瘤中的表达注：A:对照组；B:低剂量组；C:中剂量组；D:高剂量组；不同剂量 IL-9 干预后各组移植瘤中 STAT3蛋白水平无明显改变 （P > 0.05），中、高剂量组移植瘤 pSTAT3 蛋白水平显著升高（P < 0.05）Fig.3 STAT3 and pSTAT3 protein levels in xenograft tumors treated with saline and different dose of IL-9.Note：A:control；B:IL-9(90ng)；C:IL-9(180ng)；D:IL-9(360ng). The expression of STAT3 in all IL-9-treatedgroups have no significant difference compared with the control group(P>0.05). The expression of pSTAT3in the moderate-dose and high-dose group was significantly higher than the control group (P<0.05).4. 人胰腺癌移植瘤病理学形态及免疫组化染色分析HE 染色结果，如图 4 所示，瘤细胞丰富、大小、形态多不一致，核大深染、核胞质比大，呈结节状或束状或编织状排列，未见明显出血和坏死
【参考文献】
本文编号：2885739
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R735.9
【部分图文】：
图 1 IL-9 促进人胰腺癌移植瘤的生长注: control.对照组；IL-9(90ng).低剂量组；IL-9(180ng).中剂量组；IL-9(360ng).高剂量组；A. 各组人胰腺癌移植瘤生长曲线：与对照组相比，低、中、高剂量 IL-9 干预后促进移植瘤生长（P<0.05）；B. 各组人胰腺癌移植瘤的重量：中、高剂量组移植瘤平均重量显著高于对照组（P<0.05）。*P < 0.05 ，与对照组比较。Fig.1 IL-9 promotes the growth of human pancreatic cancer xenografts.Note：control；IL-9(90ng)；IL-9(180ng)；IL-9(360ng).A. Xenografts in group of IL-9 interventionaccelerate growth growth compared with control . B.The weight of tumor in the moderate-dose andhigh-dose group was the most obvious higher as compared to the control group (P<0.05).2. IL-9 干预对移植瘤 IL-9R、JAK1、JAK3、STAT3 mRNA 表达的影响为了研究 IL-9/IL-9R/STAT3 通路是否是 IL-9 对人胰腺癌移植瘤作用的潜在机制。本实验采用 RT-PCR 法分别对各组移植瘤中 IL-9R、JAK1、JAK3、
图 2 各组移植瘤 IL-9R、JAK1、JAK3 和 STAT3 mRNA 表达注: control.对照组；IL-9(90ng).低剂量组；IL-9(180ng).中剂量组；IL-9(360ng).高剂量组； A. IL-9RmRNA 水平 B. JAK1 mRNA 水平 C. JAK1 mRNA 水平 D. JAK3 mRNA 水平 ；不同剂量 IL-9 干预后各组移植瘤中 IL-9R、JAK1、JAK3、STAT3 mRNA 水平无明显改变（P > 0.05）。Fig.2 The relative expression of IL-9R,JAK1,JAK3 and STAT3 mRNANote：There was no significant difference in expression of IL-9R,JAK1,JAK3 and STAT3 mRNA ingroups(P>0.05).3. IL-9 干预对移植瘤 STAT3、pSTAT3 蛋白表达的影响Western blot结果显示，与对照组相比，应用不同剂量IL-9干预后STAT3蛋白表达无明显改变（P>0.05），而 pSTAT3 蛋白表达升高（P<0.05），以中、高剂量组较为显著，且组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。图 3
图 3 Western blot 法检测 STAT3 和 pSTAT3 在各组人胰腺癌移植瘤中的表达注：A:对照组；B:低剂量组；C:中剂量组；D:高剂量组；不同剂量 IL-9 干预后各组移植瘤中 STAT3蛋白水平无明显改变 （P > 0.05），中、高剂量组移植瘤 pSTAT3 蛋白水平显著升高（P < 0.05）Fig.3 STAT3 and pSTAT3 protein levels in xenograft tumors treated with saline and different dose of IL-9.Note：A:control；B:IL-9(90ng)；C:IL-9(180ng)；D:IL-9(360ng). The expression of STAT3 in all IL-9-treatedgroups have no significant difference compared with the control group(P>0.05). The expression of pSTAT3in the moderate-dose and high-dose group was significantly higher than the control group (P<0.05).4. 人胰腺癌移植瘤病理学形态及免疫组化染色分析HE 染色结果，如图 4 所示，瘤细胞丰富、大小、形态多不一致，核大深染、核胞质比大，呈结节状或束状或编织状排列，未见明显出血和坏死
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 Reinhild Holmer;Freya A Goumas;Georg H Waetzig;Stefan Rose-John;Holger Kalthoff;;Interleukin-6: a villain in the drama of pancreatic cancer development and progression[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2014年04期
本文编号：2885739
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