基于TLR7的全细胞疫苗抗小鼠黑色素瘤效果研究
发布时间：2020-12-01 20:28
目的:黑色素瘤是一种常见的、恶性度极高的皮肤恶性肿瘤,具有高侵袭性、高死亡率和高免疫原性等特点。临床上用于治疗黑色素瘤的易普利姆玛在Ⅱ期临床试验中,50%的患者出现了不良反应,部分更因出现严重的胰腺炎而被迫终止用药。纳武单抗也只有在辅助手术切除治疗时才具有较长的无复发生存期。因此找到一种更有效的治疗恶性黑色素瘤的方法刻不容缓。5-azacytidine（Aza）已被FDA批准用于治疗骨髓增生异常综合征,低剂量的Aza能通过去甲基化作用使机体内沉默的ERVs表达出来,从而通过病毒防御途径激活免疫。Toll样受体是连接固有免疫和获得性免疫的桥梁,Toll样受体7（TLR7）激动剂能够有效激活免疫从而发挥对抗肿瘤的作用。本研究的目的包括:（1）合成新型的TLR7小分子激动剂;（2）探索将此TLR7激动剂与经Aza处理后的黑色素瘤细胞相偶联制备全细胞肿瘤疫苗的方法;（3）验证所制备的肿瘤疫苗于小鼠体内的抗肿瘤效果。方法:（1）用化学方法合成全新的、高纯度的TLR7激动剂SZU-106,并用质谱和核磁共振波普分析进行结构鉴定。（2）用ELISA方法检测SZU-106在体外对免疫细胞的免疫激活效果...
【文章来源】：深圳大学广东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SZU-106的合成
图 2：SZU-106对 TLR7的激活作用。A.用 0.1μM, 0.5μM, 1μM, 5μM, 10μM, 20μM, 40μM 度的 SZU-106 和相同浓度的 R848 分别刺激 HEK-Blue hTLR7 细胞，得到的报告基因SEAP 的值。B、C.用 0.1μM, 0.5μM, 1μM, 5μM, 10μM, 20μM 的 SZU-106 刺激小鼠脾淋巴胞，检测免疫因子水平。数据为一次代表性实验结果中的平均值±SD 值(n=6)。相同的结在三次实验中获得。*P＜0.05；**＜0.01；***p＜0.001。3.1.3 5-氮杂胞嘧核苷(Aza)最佳浓度确定我们用不同浓度的 Aza 刺激小鼠结肠癌细胞系 CT26，黑色素瘤细胞系B16-F10 和乳腺癌细胞系 4T1，用 CCK8 试剂盒检测细胞活力后，绘制出 IC曲线。结果显示 B16-F10 对 Aza 最敏感，其 IC50值为 3.563μM (图 3 A)。为了得到最佳的免疫激活效果，我们选取了 IC50之前的浓度进行筛选。用 0μM，0.5μM，1μM，3.5μM 浓度的 Aza 刺激小鼠脾淋巴细胞，收集上清进行 ELIS检测。结果如图 3.B、C、D所示，在 Aza浓度为 0.5μM 时，产生的 IFN- γ的量
29图 3：确定 Aza最佳作用浓度。A.用 CCK8 的方法检测 0μM，1μM，10μM，100μM的 Aza对 B16-F10 的作用，得到 IC50曲线。B、C、D.用 ELISA 方法检测 0μM，0.5μM，1μM，3.5μM 的 Aza 对小鼠脾淋巴细胞的刺激作用。数据为一次代表性实验结果中的平均值±SD值(n=6)。在三次重复实验中得到了相同的结果。*P＜0.05；**＜0.01；***p＜0.001。3.1.4 Aza 能促进 B16-F10 细胞内 TLR3 蛋白表达量的影响用 Aza 刺激 B16-F10 细胞三天后，提取细胞的全蛋白进行 WB 分析。结果显示 Aza 刺激 B16-F10 细胞后，能使细胞内 TLR3 的蛋白表达量升高，且与空白对照组相比具有显著性差异，p＜0.001。Aza对 TLR3表达的促进效果与阳性对照 Pika相同（图 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PIKA Provides an Adjuvant Effect to Induce Strong Mucosal and Systemic Humoral Immunity Against SARS-CoV[J]. Wei-wei Gai 1,2,Yan Zhang 1,Di-han Zhou 1,Yao-qing Chen 2,Jing-yi Yang and Hui-min Yan 1,2 **(1.Mucosal Immunity Research Group,The State Key Laboratory of Virology,Wuhan Institute of Virology,Chinese Academy of Sciences,Wuhan 430072,China;2.The State Key Laboratory of Virology and Modern Virology Research Center,College of Life Sciences,Wuhan University,Wuhan 430072,China). Virologica Sinica. 2011(02)
本文编号：2895034
【文章来源】：深圳大学广东省
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SZU-106的合成
图 2：SZU-106对 TLR7的激活作用。A.用 0.1μM, 0.5μM, 1μM, 5μM, 10μM, 20μM, 40μM 度的 SZU-106 和相同浓度的 R848 分别刺激 HEK-Blue hTLR7 细胞，得到的报告基因SEAP 的值。B、C.用 0.1μM, 0.5μM, 1μM, 5μM, 10μM, 20μM 的 SZU-106 刺激小鼠脾淋巴胞，检测免疫因子水平。数据为一次代表性实验结果中的平均值±SD 值(n=6)。相同的结在三次实验中获得。*P＜0.05；**＜0.01；***p＜0.001。3.1.3 5-氮杂胞嘧核苷(Aza)最佳浓度确定我们用不同浓度的 Aza 刺激小鼠结肠癌细胞系 CT26，黑色素瘤细胞系B16-F10 和乳腺癌细胞系 4T1，用 CCK8 试剂盒检测细胞活力后，绘制出 IC曲线。结果显示 B16-F10 对 Aza 最敏感，其 IC50值为 3.563μM (图 3 A)。为了得到最佳的免疫激活效果，我们选取了 IC50之前的浓度进行筛选。用 0μM，0.5μM，1μM，3.5μM 浓度的 Aza 刺激小鼠脾淋巴细胞，收集上清进行 ELIS检测。结果如图 3.B、C、D所示，在 Aza浓度为 0.5μM 时，产生的 IFN- γ的量
29图 3：确定 Aza最佳作用浓度。A.用 CCK8 的方法检测 0μM，1μM，10μM，100μM的 Aza对 B16-F10 的作用，得到 IC50曲线。B、C、D.用 ELISA 方法检测 0μM，0.5μM，1μM，3.5μM 的 Aza 对小鼠脾淋巴细胞的刺激作用。数据为一次代表性实验结果中的平均值±SD值(n=6)。在三次重复实验中得到了相同的结果。*P＜0.05；**＜0.01；***p＜0.001。3.1.4 Aza 能促进 B16-F10 细胞内 TLR3 蛋白表达量的影响用 Aza 刺激 B16-F10 细胞三天后，提取细胞的全蛋白进行 WB 分析。结果显示 Aza 刺激 B16-F10 细胞后，能使细胞内 TLR3 的蛋白表达量升高，且与空白对照组相比具有显著性差异，p＜0.001。Aza对 TLR3表达的促进效果与阳性对照 Pika相同（图 4）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PIKA Provides an Adjuvant Effect to Induce Strong Mucosal and Systemic Humoral Immunity Against SARS-CoV[J]. Wei-wei Gai 1,2,Yan Zhang 1,Di-han Zhou 1,Yao-qing Chen 2,Jing-yi Yang and Hui-min Yan 1,2 **(1.Mucosal Immunity Research Group,The State Key Laboratory of Virology,Wuhan Institute of Virology,Chinese Academy of Sciences,Wuhan 430072,China;2.The State Key Laboratory of Virology and Modern Virology Research Center,College of Life Sciences,Wuhan University,Wuhan 430072,China). Virologica Sinica. 2011(02)
本文编号：2895034
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