RNA螺旋酶DHX32通过调控Rac1促进肝癌转移

发布时间：2020-12-04 12:52

　　背景:肝癌为全世界高发、高致死癌症之一,术后复发、转移率高是肝癌患者5年生存率低的重要因素,积极的抗转移治疗将让患者受益。DHX32最先由Abdelhaeem教授于2002年报道在急性淋巴细胞白血病中表达下调,并与淋巴细胞的分化有关,但其中的机制尚未明确。本课题组前期研究发现结直肠癌中DHX32表达上调,并与结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭有关。初步探明,DHX32通过β-catenin/VEGFA信号通路,调控结直肠癌的血管生成;DHX32可以促进肝癌细胞的迁移、侵袭,并可能与Racl结合,但DHX32调控肝癌细胞迁移、侵袭的机制尚未阐明。目的:本论文旨在前期研究的基础上进一步探索DHX32促进肝癌细胞转移的相关分子机制。研究对象:1)肝癌患者的病理组织石蜡切片;2)肝癌细胞株:MHCC-97H（稳定敲低DHX32的MHCC-97H及其对照细胞株）、QGY-7701;3)BALB/c裸鼠。研究方法:我们采用IHC方法,分析肝癌及癌旁的正常组织中DHX32的表达情况,并采用logistic回归的方法分析DHX32与临床病理特征的关系;在体外表达、纯化His-DHX32和GST-Rac1蛋... 

【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３．１．肝癌组织中ＤＨＸ３２蛋白的表达??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１．?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ＤＨＸ３２?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＨＣＣ?（Ｔ）?ａｎｄ?ｔｈｅｉｒ??ａｄｊａｃｅｎｔ?ｎｏｒｍａｌ?ｔｉｓｓｕｅｓ?（Ｎ），?ＤＨＸ３２??

?ＧＳＴ?—ｍ０?ｍｍ?＾??图３．３探索ＧＳＴ－ｐｕｌｌ?ｄｏｗｎ实验的最佳条件??Ｆｉｇ?３．３?Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ?ｔｈｅ?ｏｐｔｉｍａｌ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｆｏｒ?ｔｈｅ?ＧＳＴ－ｐｕｌｌ?ｄｏｗｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，??ｑｕａｎｔｉｔｙ：?Ｔｈｅ?ａｍｏｕｎｔ?ｏｆ?Ｈｉｓ－ＤＨＸ３２?ａｎｄ?ＧＳＴ－Ｒａｃｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｄｄｅｄ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；??ｂｌｏｃｋ：ＢＳＡ?（％）?＆?ｂｌｏｃｋ?ｔｉｍｅ：?ｂｌｏｃｋ?ｕｓｅｄ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｔｉｍｅ?ｏｆ?ＢＳＡ?ｉｎ?ｔｈｅ??ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．??采用最适条件，重复实验，最终结果如图３．７所示，结果表明，在体外，??ＤＨＸ３２与Ｒａｃｌ可以直接作用。??Ｈｉｓ－ＤＨＸ３２?＿?＋?？?＋?－??ＧＳＴ－Ｒａｃ１?三?＋?＋?－－??ＧＳＴ?ｃ?－?？?＋?＋??Ｈｉｓ－ＤＨＸ３２?￣ｔ￣￣?—?￣｜］ａ４）ＨＸ３２??ＧＳＴ－Ｒａｃ１?－一一?１?ａ－Ｒａｃ１??ＧＳＴ?—￣＾｜］ａ－ＧＳＴ??图３．４．?ＤＨＸ３２与Ｒａｃｌ相互结合??Ｆｉｇｕｒｅ?３．４．?Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＤＨＸ３２?ａｎｄ?Ｒａｃｌ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ?ａｎｄ??ｐｕｒｉｆｉｅｄ?Ｈｉｓ－ｔａｇｇｅｄ?ＤＨＸ３２?ａｎｄ?ＧＳＴ－ｔａｇｇｅｄ?Ｒａｃｌ?ｗｅｒｅ?ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ?ｔｏ?ＧＳＴ?ｐｕｌｌ－ｄｏｗｎ??ａｓｓａｙｓ?ａｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅｄ．?ＤＨＸ３２，?ＧＴＰ－Ｒａｃｌ?ａｎｄ?ＧＴＰ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ｗｅｒ

ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍｉｄｅ）分别处理细胞Ｏｈ、４ｈ、８ｈ和丨２ｈ，然后收取细胞??裂解液，检测Ｒａｃｌ的蛋白水平并用灰度分析的方法绘制蛋白变化曲线。结果如??图３．８所示，和对照组相比，敲低ＤＨＸ３２使Ｒａｃｌ蛋白的降解速度加快，而过??表达ＤＨＸ３２使Ｒａｃｌ蛋白的降解速度减慢，说明ＤＨＸ３２通过与Ｒａｃｌ相互结合??并抑制它的泛素化降解


本文编号：2897639