肺癌患者组织和血清miRNA的表达谱筛选及miR-486-5p的细胞学功能研究
发布时间：2020-12-05 20:27
在全球范围内肺癌已是由癌症引发死亡最主要的因素。在中国,肺癌的发生率和死亡率均位居癌症中第一位。miRNA是一类小的内源性的非编码单链RNA分子,长度约为18-25个核苷酸,大量研究表明miRNA在包括肺癌在内的多种癌症中异常表达,miRNA的表征或许能为肺癌的发病机制、诊断和治疗的研究提供新的思路。高通量测序相较于传统检测方法,对miRNA的检测在通量和效率上拥有无可比拟的优势。本论文研究主要基于高通量测序技术对成套的肺癌组织和血清样本中miRNA表达谱进行检测分析并筛选了miR-486-5p进行细胞学功能研究。（1）肺癌成套组织样本miRNA表达谱筛选:利用高通量测序技术同时对成套的肺癌癌组织、癌旁组织和正常组织中miRNA进行表达谱筛选。在鳞癌和腺癌中分别发现了多种差异表达的miRNA,其中部分miRNA的表达水平从正常组织到癌旁组织再到癌组织中呈渐进性变化趋势。其中,鳞癌中有12种渐进性变化趋势的miRNA,腺癌中有3种。这些渐进性变化的miRNA表达水平在定量PCR实验中获得了证实,进一步分析发现差异表达miRNA的靶基因在非小细胞肺癌通路中呈现显著富集,该结果表明渐进性变化...
【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
miRNA生物学功能的作用机制[40]
1.2.5.1 Northern BlotNorthern Blot（Northern 杂交）技术由斯坦福大学 Alwine James, Kemp David和 Stark George 于 1977 年发明，是一种检测 RNA 表达水平的方法。其命名实际上依照更早发明的 DNA 杂交技术 Southern Blot。其原理是首先通过电泳将 RNA分子分离，然后通过互补配对与探针杂交来检测目标 RNA（图 1-4）。早在 Lee等人发现 miRNA 之时使用的检测方法即是 Northern Blot[26]。之后大量研究利用 Northern Blot 或改进的杂交方法检测 miRNA[72,73]。为了提高 Northern Blot的灵敏度和特异性，研究人员使用一种锁核酸（Locked nucleic acid, LNA）修饰的探针对 miRNA 进行检测[74,75]。然而 Northern Blot 技术仍然存在不少缺点：对样本需求量较大，实验相对繁琐，周期较长，而且通量和灵敏度均很低。
成反应体系中分别加入一定比例带有放射性同位素标记的 ddNTP，通过泳和放射自显影后可以根据电泳带的位置确定待测分子的 DNA序列（图1]。Sanger 测序的优势在于测序结果准确，质控环节多，测序片段长，到止仍是基因检测的金标准，也是新一代测序技术基因检测后进行家系内和验证的主要手段。但是 Sanger 测序的通量、效率和花费是无法和新一代术相比（新一代测序技术在 1.3 节中介绍）。截至目前测序技术共经历了三一代 Sanger 测序到二代高通量测序，再到三代单分子测序。至今 40 年时序技术已经取得了巨大的发展和突破。测序技术的每一次变革，都对基因、疾病医疗研究、药物研发、育种等众多领域产生了巨大的推动作用（图 1-高通量测序相较于传统检测方法，对 miRNA 的检测在通量和效率上拥比拟的优势，能直接检测 miRNA 的拷贝数，而且能够发现和鉴定新的 miR序技术尤其是高通量测序平台出现时起就被广泛应用于 miRNA 的检测和（详见 1.3.2 节）。
本文编号：2900041
【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
miRNA生物学功能的作用机制[40]
1.2.5.1 Northern BlotNorthern Blot（Northern 杂交）技术由斯坦福大学 Alwine James, Kemp David和 Stark George 于 1977 年发明，是一种检测 RNA 表达水平的方法。其命名实际上依照更早发明的 DNA 杂交技术 Southern Blot。其原理是首先通过电泳将 RNA分子分离，然后通过互补配对与探针杂交来检测目标 RNA（图 1-4）。早在 Lee等人发现 miRNA 之时使用的检测方法即是 Northern Blot[26]。之后大量研究利用 Northern Blot 或改进的杂交方法检测 miRNA[72,73]。为了提高 Northern Blot的灵敏度和特异性，研究人员使用一种锁核酸（Locked nucleic acid, LNA）修饰的探针对 miRNA 进行检测[74,75]。然而 Northern Blot 技术仍然存在不少缺点：对样本需求量较大，实验相对繁琐，周期较长，而且通量和灵敏度均很低。
成反应体系中分别加入一定比例带有放射性同位素标记的 ddNTP，通过泳和放射自显影后可以根据电泳带的位置确定待测分子的 DNA序列（图1]。Sanger 测序的优势在于测序结果准确，质控环节多，测序片段长，到止仍是基因检测的金标准，也是新一代测序技术基因检测后进行家系内和验证的主要手段。但是 Sanger 测序的通量、效率和花费是无法和新一代术相比（新一代测序技术在 1.3 节中介绍）。截至目前测序技术共经历了三一代 Sanger 测序到二代高通量测序，再到三代单分子测序。至今 40 年时序技术已经取得了巨大的发展和突破。测序技术的每一次变革，都对基因、疾病医疗研究、药物研发、育种等众多领域产生了巨大的推动作用（图 1-高通量测序相较于传统检测方法，对 miRNA 的检测在通量和效率上拥比拟的优势，能直接检测 miRNA 的拷贝数，而且能够发现和鉴定新的 miR序技术尤其是高通量测序平台出现时起就被广泛应用于 miRNA 的检测和（详见 1.3.2 节）。
本文编号：2900041
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