HPV16 E6/E7通过DNA甲基化修饰导致原代角质形成细胞恶性转变的机制研究
发布时间：2020-12-07 22:45
高危型人乳头瘤病毒（High-risk Humanpapillomavirus,HR-HPVs）的感染（如HPV16）是细胞发生恶性转变的必要条件,E6和E7是其主要的致癌基因。HPV16可通过表观遗传学路径导致肿瘤的发生,其中研究最多的是DNA甲基化。我们设想HPV16E6/E7可以通过DNA甲基化修饰导致细胞的恶性转化。本研究将HPV16 E6/E7通过慢病毒感染的方式转入原代人包皮角质形成细胞（Human Foreskin Keratinocytes,HFKs）构建永生化细胞系并进行鉴定;观察将HPV16E6/E7转入原代细胞及分别沉默肿瘤细胞中HPV16E6或E7后,DNMTs的表达情况,目的基因的甲基化水平及表达情况;最后,将永生化细胞及宫颈癌细胞（SiHa、CaSki）进行全基因组DNA序列、全基因组RNA及DNA甲基化测序,通过数据分析,筛选并发现在细胞永生化及肿瘤细胞形成过程中发挥不同功能的目的基因,为进一步研究基因的功能奠定基础。第一部分永生化角质形成细胞的构建与鉴定目的:将HPV16E6/E7转入原代HFKs,构建永生化细胞,并对永生化HFKs进行鉴定。方法:（1）...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１．３不同代数ＨＦＫｓ的形态??
表真皮分离?放入胰酶－ＥＤＴＡ?培养基过２００目筛网?离心管底可见沉淀??图１．１．２原代ＨＦＫｓ的分离－２??３．２通过体外无血清培养基培养法，成功获得原代ＨＦＫｓ，并可传代、冻存、复苏。??在不含血清的ＨＦＫｓ培养基（５００ｍＬＥｐｉＬｉｆｅ培养基＋?５ｍＬＨＫＧＳ）中，３天左右可??见数个ＨＦＫｓ形成的小集落，７天左右细胞汇合成片。第１代ＨＦＫｓ生长旺盛，轮??廓清楚，折光性好，形态呈扁平不规则多边形，状似铺路石，核为卵圆形（图１．１．３??Ａ、Ｂ）。连续传代１０次左右，细胞出现衰老表现：扩增速度减慢，体积增大，失去??原来形态，出现膜化现象（图１．１．３?Ｃ）。??
新鲜包皮组织?去除皮下脂肪组织?剪成ｌｃｍｘｌｃｍ大小?放入Ｄｉｓｐａｓｅｌｌ??图１．１．１原代ＨＦＫｓ的分离－１??ＫＵＥｕ??表真皮分离?放入胰酶－ＥＤＴＡ?培养基过２００目筛网?离心管底可见沉淀??图１．１．２原代ＨＦＫｓ的分离－２??３．２通过体外无血清培养基培养法，成功获得原代ＨＦＫｓ，并可传代、冻存、复苏。??在不含血清的ＨＦＫｓ培养基（５００ｍＬＥｐｉＬｉｆｅ培养基＋?５ｍＬＨＫＧＳ）中，３天左右可??见数个ＨＦＫｓ形成的小集落，７天左右细胞汇合成片。第１代ＨＦＫｓ生长旺盛，轮??廓清楚，折光性好，形态呈扁平不规则多边形，状似铺路石，核为卵圆形（图１．１．３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Aberrant DNA methylation in cervical carcinogenesis[J]. Hui-Juan Yang. Chinese Journal of Cancer. 2013(01)
[2]慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在小鼠T淋巴细胞中的表达[J]. 李振宇,徐开林,潘秀英,孙海英,高飞,鹿群先,李德鹏,何徐彭. 中国实验血液学杂志. 2007(01)
[3]人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用[J]. 司马妮,王薇,徐茜,田训,罗爱月,卢运萍,王世宣,马丁. 癌症. 2007(01)
[4]Immortalization of human articular chondrocytes and induction of their phenotype[J]. 何清义,李起鸿,杨柳,许建中. Chinese Medical Journal. 2003(09)
硕士论文
[1]非黑素瘤性皮肤肿瘤中Beta-人乳头瘤病毒感染分析及机制探讨[D]. 徐亚楠.第四军医大学 2013
本文编号：2904012
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：137 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１．３不同代数ＨＦＫｓ的形态??
表真皮分离?放入胰酶－ＥＤＴＡ?培养基过２００目筛网?离心管底可见沉淀??图１．１．２原代ＨＦＫｓ的分离－２??３．２通过体外无血清培养基培养法，成功获得原代ＨＦＫｓ，并可传代、冻存、复苏。??在不含血清的ＨＦＫｓ培养基（５００ｍＬＥｐｉＬｉｆｅ培养基＋?５ｍＬＨＫＧＳ）中，３天左右可??见数个ＨＦＫｓ形成的小集落，７天左右细胞汇合成片。第１代ＨＦＫｓ生长旺盛，轮??廓清楚，折光性好，形态呈扁平不规则多边形，状似铺路石，核为卵圆形（图１．１．３??Ａ、Ｂ）。连续传代１０次左右，细胞出现衰老表现：扩增速度减慢，体积增大，失去??原来形态，出现膜化现象（图１．１．３?Ｃ）。??
新鲜包皮组织?去除皮下脂肪组织?剪成ｌｃｍｘｌｃｍ大小?放入Ｄｉｓｐａｓｅｌｌ??图１．１．１原代ＨＦＫｓ的分离－１??ＫＵＥｕ??表真皮分离?放入胰酶－ＥＤＴＡ?培养基过２００目筛网?离心管底可见沉淀??图１．１．２原代ＨＦＫｓ的分离－２??３．２通过体外无血清培养基培养法，成功获得原代ＨＦＫｓ，并可传代、冻存、复苏。??在不含血清的ＨＦＫｓ培养基（５００ｍＬＥｐｉＬｉｆｅ培养基＋?５ｍＬＨＫＧＳ）中，３天左右可??见数个ＨＦＫｓ形成的小集落，７天左右细胞汇合成片。第１代ＨＦＫｓ生长旺盛，轮??廓清楚，折光性好，形态呈扁平不规则多边形，状似铺路石，核为卵圆形（图１．１．３??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Aberrant DNA methylation in cervical carcinogenesis[J]. Hui-Juan Yang. Chinese Journal of Cancer. 2013(01)
[2]慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在小鼠T淋巴细胞中的表达[J]. 李振宇,徐开林,潘秀英,孙海英,高飞,鹿群先,李德鹏,何徐彭. 中国实验血液学杂志. 2007(01)
[3]人乳头瘤病毒16型E6、E7反义RNA对人宫颈癌SiHa细胞的恶性逆转作用[J]. 司马妮,王薇,徐茜,田训,罗爱月,卢运萍,王世宣,马丁. 癌症. 2007(01)
[4]Immortalization of human articular chondrocytes and induction of their phenotype[J]. 何清义,李起鸿,杨柳,许建中. Chinese Medical Journal. 2003(09)
硕士论文
[1]非黑素瘤性皮肤肿瘤中Beta-人乳头瘤病毒感染分析及机制探讨[D]. 徐亚楠.第四军医大学 2013
本文编号：2904012
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