EZH2在前列腺癌早期诊断及去势抵抗性前列腺癌耐药中的作用及机制研究
发布时间：2020-12-18 13:18
目的:揭示前列腺液中EZH2的表达在前列腺癌诊断中可能的临床价值,为非损伤性前列腺癌诊断提供新思路。探索EZH2在去势抵抗性前列腺癌多西他赛耐药中的作用及其机制。方法:收集临床有前列腺穿刺指征的可疑前列腺癌患者的前列腺液,根据病理结果分组;通过RT-PCR及酶联免疫吸附法检测前列腺液中不同分组EZH2的表达水平;分析EZH2在前列腺癌早期诊断中的临床应用价值,以及与临床病理特征之间的关系。通过间断递增浓度的方法构建去势抵抗性前列腺癌多西他赛耐药细胞株PC-3/DR,并应用实时定量PCR和western-blotting（WB）检测细胞株耐药前后EZH2m RNA和蛋白的表达变化。再应用流式细胞仪和MTT检测了EZH2抑制单独或者联合多西他赛对耐药细胞迁移、侵袭、凋亡和增殖能力的影响。然后,通过裸鼠皮下注射PC-3/DR细胞和EZH2稳定转染的PC-3/DR细胞,建立了荷瘤鼠模型,并观察了RNAi联合多西他赛对肿瘤瘤体、荷瘤鼠体重等的影响。最后,应用免疫组化和Western bloting检测了瘤体的EZH2、H3-（me）3-K27和Bcl-2的蛋白表达。结果:前列腺癌组前列腺液中EZ...
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
A）ELISA法检测各组受试者前列腺液中EZH2蛋白的表达量；B)Real-timePCR定量分析各组受试者前列腺液中EZH2mRNA的表达量
类别 tPSA fPSA EZH2 mRNA灰度比值EZH2 mRNA相对定量值年龄 0.075/0.695 0.043/0.801 -0.146/0.556 0.082/0.695Gleason 评分 -0.322/0.115 -0.433/0.059 0.866/0.000 0.839/0.000TNM 分期 0.239/0.522 0.086/0.776 0.056/0.845 -0.013/0.912前列腺体积 -0.232/0.442 -0.233/0.633 0.565/0.013 0.323/0.1985. PSA、EZH2 mRNA 灰度比值、相对定量值的灵敏度和特异度我们利用 ROC 曲线分析了 PSA、EZH2 灰度比值和相对定量值的灵敏度和特异度，结果如图 1-2 和表 1-7 所示。结果显示，EZH2 相对定量值的曲线下面积最大，达到 0.935，明显高于 EZH2 mRNA 的灰度值和 PSA，说明其诊断前列腺癌的价值优于 EZH2 mRNA灰度值和 PSA。当 EZH2 mRNA 相对定量值取 0.66时，其敏感度为 100%，特异度达到 83.2%。
采用 SPSS 17.0 进行统计分析，数据以均数 ±标准差（ x ±SD）表示，采用 t检验或者卡方检验来检验样本均数，且均经过正态性验证，若不符合正态性分布，则采用秩和检验进行验证，采用单因素方差分析 (One-Way ANOVA)来分析多组数据， P < 0.05为有统计学意义。结 果1. CRPC 耐药株 PC-3/DR 细胞形态学变化为研究 EZH2 在去势抵抗性前列腺癌多西他赛耐药中的作用，我们首先采用多西他赛浓度递增的方法诱导建立了 PC-3 多西他赛耐药株，PC-3/DR。经过 5 个多月逐步诱导后，PC-3/DR 可以在 50 nmol/l 多西他赛剂量下稳定生长。我们首先观察了PC-3 耐药前后的形态学变化。如图 2-1 所示，PC-3/DR 细胞能贴壁生长，与 PC-3 相比，附壁能力无明显差异。相对 PC-3，PC-3/DR 的形态有所改变，细胞由形态规则变为相对不规则，核的体积变小。
【参考文献】：
期刊论文
[1]EZH2与肿瘤的研究进展[J]. 曹春雨,杨凡,王艳林. 生命的化学. 2016(05)
[2]EZH2基因在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞系的表达及其对细胞增殖的影响[J]. 骆广涛,施航,王本忠. 中华乳腺病杂志(电子版). 2015(01)
[3]前列腺穿刺活检术后并发症的相关因素分析:多中心回顾性研究[J]. 刘秉乾,梁宏,张国兵,王义昆,武玉东,范志强,冯超杰,胡建庭,张昊,潘周辉,王智勇,刘新奎,王玲,李鑫,魏金星. 中华泌尿外科杂志. 2014 (09)
[4]前列腺癌动物模型的研究进展[J]. 黄烨清,陈明. 东南大学学报(医学版). 2014(02)
[5]乳腺癌多西他赛耐药的分子机制[J]. 吴新刚,黄谦,向安萍. 肿瘤防治研究. 2014(04)
[6]EZH2基因在肿瘤方面的研究进展[J]. 王红梅,呼群,苏乌云. 医学综述. 2014(07)
[7]实时定量PCR检测技术研究进展[J]. 王惠,钱冲,郭峰,关超,苏长青,白洪志. 种子. 2013(06)
[8]EZH2基因与肿瘤关系的研究进展[J]. 吕佳,孙晓阳,丁涟沭. 临床神经病学杂志. 2012(02)
[9]前列腺特异性抗原异常患者前列腺液细胞学检查的临床分析[J]. 陈鑫,李宇峰,王萍,岳东民,叶青,杨卓,臧伟清,王广浩,曲晓光,高福金. 中华泌尿外科杂志. 2012 (02)
[10]组蛋白甲基化转移酶EZH2在卵巢癌组织中的表达及意义[J]. 唐移忠,田金华,曾定元. 现代预防医学. 2009(10)
硕士论文
[1]EZH2基因在前列腺癌中的表达及其功能研究[D]. 王臻帆.苏州大学 2011
本文编号：2924064
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
A）ELISA法检测各组受试者前列腺液中EZH2蛋白的表达量；B)Real-timePCR定量分析各组受试者前列腺液中EZH2mRNA的表达量
类别 tPSA fPSA EZH2 mRNA灰度比值EZH2 mRNA相对定量值年龄 0.075/0.695 0.043/0.801 -0.146/0.556 0.082/0.695Gleason 评分 -0.322/0.115 -0.433/0.059 0.866/0.000 0.839/0.000TNM 分期 0.239/0.522 0.086/0.776 0.056/0.845 -0.013/0.912前列腺体积 -0.232/0.442 -0.233/0.633 0.565/0.013 0.323/0.1985. PSA、EZH2 mRNA 灰度比值、相对定量值的灵敏度和特异度我们利用 ROC 曲线分析了 PSA、EZH2 灰度比值和相对定量值的灵敏度和特异度，结果如图 1-2 和表 1-7 所示。结果显示，EZH2 相对定量值的曲线下面积最大，达到 0.935，明显高于 EZH2 mRNA 的灰度值和 PSA，说明其诊断前列腺癌的价值优于 EZH2 mRNA灰度值和 PSA。当 EZH2 mRNA 相对定量值取 0.66时，其敏感度为 100%，特异度达到 83.2%。
采用 SPSS 17.0 进行统计分析，数据以均数 ±标准差（ x ±SD）表示，采用 t检验或者卡方检验来检验样本均数，且均经过正态性验证，若不符合正态性分布，则采用秩和检验进行验证，采用单因素方差分析 (One-Way ANOVA)来分析多组数据， P < 0.05为有统计学意义。结 果1. CRPC 耐药株 PC-3/DR 细胞形态学变化为研究 EZH2 在去势抵抗性前列腺癌多西他赛耐药中的作用，我们首先采用多西他赛浓度递增的方法诱导建立了 PC-3 多西他赛耐药株，PC-3/DR。经过 5 个多月逐步诱导后，PC-3/DR 可以在 50 nmol/l 多西他赛剂量下稳定生长。我们首先观察了PC-3 耐药前后的形态学变化。如图 2-1 所示，PC-3/DR 细胞能贴壁生长，与 PC-3 相比，附壁能力无明显差异。相对 PC-3，PC-3/DR 的形态有所改变，细胞由形态规则变为相对不规则，核的体积变小。
【参考文献】：
期刊论文
[1]EZH2与肿瘤的研究进展[J]. 曹春雨,杨凡,王艳林. 生命的化学. 2016(05)
[2]EZH2基因在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞系的表达及其对细胞增殖的影响[J]. 骆广涛,施航,王本忠. 中华乳腺病杂志(电子版). 2015(01)
[3]前列腺穿刺活检术后并发症的相关因素分析:多中心回顾性研究[J]. 刘秉乾,梁宏,张国兵,王义昆,武玉东,范志强,冯超杰,胡建庭,张昊,潘周辉,王智勇,刘新奎,王玲,李鑫,魏金星. 中华泌尿外科杂志. 2014 (09)
[4]前列腺癌动物模型的研究进展[J]. 黄烨清,陈明. 东南大学学报(医学版). 2014(02)
[5]乳腺癌多西他赛耐药的分子机制[J]. 吴新刚,黄谦,向安萍. 肿瘤防治研究. 2014(04)
[6]EZH2基因在肿瘤方面的研究进展[J]. 王红梅,呼群,苏乌云. 医学综述. 2014(07)
[7]实时定量PCR检测技术研究进展[J]. 王惠,钱冲,郭峰,关超,苏长青,白洪志. 种子. 2013(06)
[8]EZH2基因与肿瘤关系的研究进展[J]. 吕佳,孙晓阳,丁涟沭. 临床神经病学杂志. 2012(02)
[9]前列腺特异性抗原异常患者前列腺液细胞学检查的临床分析[J]. 陈鑫,李宇峰,王萍,岳东民,叶青,杨卓,臧伟清,王广浩,曲晓光,高福金. 中华泌尿外科杂志. 2012 (02)
[10]组蛋白甲基化转移酶EZH2在卵巢癌组织中的表达及意义[J]. 唐移忠,田金华,曾定元. 现代预防医学. 2009(10)
硕士论文
[1]EZH2基因在前列腺癌中的表达及其功能研究[D]. 王臻帆.苏州大学 2011
本文编号：2924064
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