MicroRNA-346通过靶向BRMS1调控肝癌增殖、迁移和侵袭的初步研究
发布时间：2021-01-06 00:12
背景肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是人类最常见的恶性肿瘤之一。随着血清甲胎蛋白（AFP）检测的普及,影像学检查技术的进步以及人们健康意识的提高,近年来对于早期肝癌的诊出率较以前有了明显的提高,虽然外科手术技术以及微创治疗技术的日渐成熟和大范围推广,但肝癌的总体预后仍不理想,这与肝癌侵袭性和转移能力强密不可分。MicroRNA（miRNA）是长约20～25个核苷酸,具有调控功能的内源性非编码RNA。越来越多的研究表明miRNAs与肝癌的发生、转移、侵袭及预后密切相关。miR-346在多种肿瘤中发挥癌基因的功能,但miR-346在肝癌发生发展中的报道还很少见。我们首先检测了 miR-346在肝癌组织和肝癌细胞中的表达水平,并分析与肝癌患者临床病理特征和预后的关系,以及对肝癌细胞生物学行为的影响。然后通过生物信息学软件预测并在体内外实验中证实miR-346通过抑制BRMS1的表达促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,并减少肝癌细胞凋亡,为肝细胞肝癌的治疗提供了新的靶点。第一部分miR-346在肝癌中的表达及生物学功能研究目的研究miR-346在肝癌组织中的表达...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．７荧光显微镜下观察感染效率（１００?Ｘ）??Ｆｉｇ?１．７?Ｔｈｅ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｗａｓ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｕｎｄｅｒ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?（１００?Ｘ?）??
告基因实验。结果发现，与对照组相比，外源性高表达的ｍｉＲ－３４６可以明显降??低携带野生型ＢＲＭＳ１?３’－ＵＴＲ报告基因的活性（Ｐ＜０．０５），而对于携带突变型??ＢＲＭＳ１３’－ＵＴＲ报告基因的活性没有影响（图２．２）。为了进一步验证，我们在??过表达ｍｉＲ－３４６的ＳＭＭＣ－７７２１细胞和Ｂｅｌ－７４０２细胞中，应用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ和??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ在ｍＲＮＡ和蛋白水平验证ｍｉＲ－３４６对ＢＲＭＳ１的影响，同时在低表??达ｍｉＲ－３４６的ＨｅｐＧ２细胞和ＭＨＣＣ－９７Ｈ细胞中进行反向验证。结果如图２．３所??示，过表达ｍｉＲ－３４６在ｍＲＮＡ和蛋白水平均可以下调ＢＲＭＳ１的表达，且差异??有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）。下调ｍｉＲ－３４６的表达后，ＢＲＭＳ１在ｍＲＮＡ和蛋白水??平的表达均较对照组显著上调，差异有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）。综合以上结果，??我们可以认定ＢＲＭＳ１是ｍｉＲ－３４６的一个靶基因。??４８??
Ａｄｊａｃｅｎｔ?ＨＣＣ??图２．５?ＢＲＭＳｌ蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达水平??Ｆｉｇ２．５?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＢＲＭＳ?ｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ｌｉｖｅｒ?ｃａｎｃｅｒ?ａｎｄ?ａｄｊａｃｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??４．１?ＢＲＭＳｌ组织芯片染色结果??ＢＲＭＳ１阳性表达位于胞浆和胞核内，我们根据ＢＲＭＳ１染色强度和范围的??４、同，对ＢＲＭＳ１的表达水平进行评分，从低表达到尚表达分为：ｓｃｏｒｅ?０＋、ｓｃｏｒｅ??１＋、ｓｃｏｒｅ?２＋、ｓｃｏｒｅ?３＋、ｓｃｏｒｅ?４＋?（见图?２．６）?〇??Ｓｃｏｒｅ?Ｏｆ?Ｓｃｏｒｅ?１＋?Ｓｃｏｒｅ?２＋?Ｓｃｏｒｅ?３＋?Ｓｃｏｒｅ?４＋??图２．６?ＢＲＭＳｌ在肝癌组织芯片中的表达??Ｆｉｇ２．６?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＢＲＭＳｌ?ｉｎ?ＨＣＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｏｎ?ＴＭＡ?ｓｌｉｄｅ
本文编号：2959543
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：117 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．７荧光显微镜下观察感染效率（１００?Ｘ）??Ｆｉｇ?１．７?Ｔｈｅ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｗａｓ?ｏｂｓｅｒｖｅｄ?ｕｎｄｅｒ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ?（１００?Ｘ?）??
告基因实验。结果发现，与对照组相比，外源性高表达的ｍｉＲ－３４６可以明显降??低携带野生型ＢＲＭＳ１?３’－ＵＴＲ报告基因的活性（Ｐ＜０．０５），而对于携带突变型??ＢＲＭＳ１３’－ＵＴＲ报告基因的活性没有影响（图２．２）。为了进一步验证，我们在??过表达ｍｉＲ－３４６的ＳＭＭＣ－７７２１细胞和Ｂｅｌ－７４０２细胞中，应用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ和??Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ在ｍＲＮＡ和蛋白水平验证ｍｉＲ－３４６对ＢＲＭＳ１的影响，同时在低表??达ｍｉＲ－３４６的ＨｅｐＧ２细胞和ＭＨＣＣ－９７Ｈ细胞中进行反向验证。结果如图２．３所??示，过表达ｍｉＲ－３４６在ｍＲＮＡ和蛋白水平均可以下调ＢＲＭＳ１的表达，且差异??有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）。下调ｍｉＲ－３４６的表达后，ＢＲＭＳ１在ｍＲＮＡ和蛋白水??平的表达均较对照组显著上调，差异有统计学意义（Ｐ＜〇．〇５）。综合以上结果，??我们可以认定ＢＲＭＳ１是ｍｉＲ－３４６的一个靶基因。??４８??
Ａｄｊａｃｅｎｔ?ＨＣＣ??图２．５?ＢＲＭＳｌ蛋白在肝癌和癌旁组织中的表达水平??Ｆｉｇ２．５?Ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｌｅｖｅｌ?ｏｆ?ＢＲＭＳ?ｌ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｉｎ?ｌｉｖｅｒ?ｃａｎｃｅｒ?ａｎｄ?ａｄｊａｃｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ??４．１?ＢＲＭＳｌ组织芯片染色结果??ＢＲＭＳ１阳性表达位于胞浆和胞核内，我们根据ＢＲＭＳ１染色强度和范围的??４、同，对ＢＲＭＳ１的表达水平进行评分，从低表达到尚表达分为：ｓｃｏｒｅ?０＋、ｓｃｏｒｅ??１＋、ｓｃｏｒｅ?２＋、ｓｃｏｒｅ?３＋、ｓｃｏｒｅ?４＋?（见图?２．６）?〇??Ｓｃｏｒｅ?Ｏｆ?Ｓｃｏｒｅ?１＋?Ｓｃｏｒｅ?２＋?Ｓｃｏｒｅ?３＋?Ｓｃｏｒｅ?４＋??图２．６?ＢＲＭＳｌ在肝癌组织芯片中的表达??Ｆｉｇ２．６?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＢＲＭＳｌ?ｉｎ?ＨＣＣ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｏｎ?ＴＭＡ?ｓｌｉｄｅ
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