GFP-α-tubulin/GFP-CENP-A-HeLa细胞系的建立及其功能评价

发布时间：2021-01-18 10:13

　　肿瘤作为慢性非传染疾病已成为危害人类健康并导致死亡的头号杀手,世卫组织发布的最新癌症报告显示恶性肿瘤发病率与死亡率依然呈现迅猛增长的趋势。因此从细胞分子水平研究肿瘤的发生机制,为肿瘤的治疗及预防奠定基础有着迫切的需要。随着近年来分子影像学的发展,高分辨高速的活细胞成像显微镜系统日益成熟,这就为从细胞层面动态研究肿瘤的发生发展机制提供了强有力的工具。而如何应用该技术,达到筛查治疗肿瘤有效化学药物的目标,迫切需要构建一种能够反映化疗药物是否损伤肿瘤细胞的、稳定表达微管和着丝粒相关蛋白质的荧光报告细胞系模型,通过观察肿瘤细胞的行为变化,为肿瘤的治疗提供有效的化疗药物筛查的工具。细胞周期的错误调节可以导致肿瘤的发生。细胞周期中的有丝分裂过程是一个精细调节的过程,其中每一对染色体都需要正确的连接来自于两极的微管,如果着丝粒与微管的附着错误就会导致染色体的排列错误,进而导致染色体分离的异常,促进染色体不稳定性的发生,最终产生非整倍体的细胞,导致肿瘤的发生。为了更直观的精确研究染色体与微管的运动结合过程,预期构建标记GFP绿色荧光蛋白质的微管和着丝粒相关蛋白质的肿瘤细胞系,从而利用活细胞显微工作站来... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

凝胶电泳显示PCR片段结果

图 2： 凝胶电泳显示酶切载体前后结果切的载体与目的片段的连接与转化接体系：体与目的片段的摩尔数比=1：3 or 5buffer 1.5 μl X片段 X酶 1 μl2O Xal 15 μl连接过夜。（一般大于 8h）化（一般取连接产物的一半做转化）

图 3： 菌落生长显示片段与载体连接结果左图为自连对照，右图为连接体系如图所示，载体自连对照组未见菌落，而重组转化组可见.5 菌液 PCR 鉴定及测序鉴定a) 用无菌的 10μl 枪头挑取单克隆菌落（一般挑取 3-5 个）那霉素抗性的 LB 培养基中，37℃震荡培养 4h。b) 待培养基变浑浊，取 1μl 菌液进行。（PCR 体系同上所c) 琼脂糖凝胶电泳鉴定菌液 PCR 结果。d) 将阳性菌落的菌液送至 invitrogen 公司测序。从 PCR 的结果可以看出，所挑取的 5 个克隆有 3 个阳Marker — + 1# 2# 3# 4#


本文编号：2984769