胆汁酸核受体FXR调控结直肠癌Wnt/β-catenin信号通路的机制研究
发布时间：2021-01-19 04:44
第一部分胆汁酸核受体FXR调控结直肠癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的机制研究目的:探讨胆汁酸核受体FXR对结直肠癌细胞Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其机制。方法:选用人结肠癌细胞株Caco-2、HCT-116、HT-29,采用Western blot检测FXR及β-catenin的表达水平。siRNA沉默FXR后,采用双荧光素酶报告系统检测β-catenin转录活性的变化,采用Western blot检测β-catenin蛋白水平的表达变化。分别经不同浓度FXR激动剂GW4064（1、3、5umol/L）干预12、24、36和48h,采用噻唑兰试验（MTT）测细胞增殖能力的变化。GW4064干预后,采用凝胶迁移实验（EMSA）检测NF-κB的转录活性;采用双荧光素酶报告系统检测β-catenin的转录活性变化,采用EMSA检测β-catenin/TCF4复合物水平,Western blot检测GW4064干预后细胞核内β-catenin及总蛋白水平的变化,并采用qRT-PCR检测β-catenin mRNA水平的表达变化。在GW4064干预下,予以NF-κB信...
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１不同结肠癌细胞ＦＸＲ及Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白水平的表达??
转染ＦＸＲ?ｓｉＲＮＡ?４８ｈ后提取蛋白，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的方法，检测｜３－ｃａｔｅｎｉｎ总??蛋白水平的变化。实验重复３次。结果显示，与对照组相比，沉默组ＨＴ－２９、Ｃａｃｏ－２、??ＨＣＴ－１１６细胞中ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的总蛋白水平无明显变化（图４）。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＦＸＲ?ｓｉＲＮＡ??（３－ｃａｔｅｎｉｎ??ＨＴ－２９??Ｐ－ａｃｔｍ?－?ＵＰＰ??Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??Ｃａｃｏ－２??ｐ－ａｃｔｉｎ??Ｐ－ｃａｔｅｎ，??ＨＣＴ＇１１６?一????ｐ－ａｃｔｉｎ??图４沉默ＦＸＲ对结肠癌细胞中Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ总蛋白水平的影响??３．?ＦＸＲ激动剂ＧＷ４０６４对结肠癌细胞增殖的影响??ＨＴ－２９、Ｃａｃｏ－２、ＨＣＴ－１１６结肠癌细胞分别经不同浓度ＦＸＲ激动剂ＧＷ４０６４?（１、??３、５ｕｍｏｌ／Ｌ）干预１２、２４、３６和４８ｈ，采用ＭＴＴ法检测细胞増殖能力的变化。结??果显示，ＧＷ４０６４对三种细胞株的增殖均有显著抑制作用，且随浓度的增加，其抑??制作用逐渐增强，提示抑制作用呈浓度和时间依赖性（图５－７，表８－１３）。??３０??
３、５ｕｍｏｌ／Ｌ）干预１２、２４、３６和４８ｈ，采用ＭＴＴ法检测细胞増殖能力的变化。结??果显示，ＧＷ４０６４对三种细胞株的增殖均有显著抑制作用，且随浓度的增加，其抑??制作用逐渐增强，提示抑制作用呈浓度和时间依赖性（图５－７，表８－１３）。??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inflammatory pathways in the early steps of colorectal cancer development[J]. Francesco Mariani,Paola Sena,Luca Roncucci. World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
[2]emerging role of the β-catenin-PPARγ axis in the pathogenesis of colorectal cancer[J]. Lina Sabatino,Massimo Pancione,Carolina Votino,Tommaso Colangelo,Angelo Lupo,Ettore Novellino,Antonio Lavecchia,Vittorio Colantuoni. World Journal of Gastroenterology. 2014(23)
[3]High-fat-induced intestinal permeability dysfunction associated with altered fecal bile acids[J]. Lotta K Stenman,Reetta Holma,Riitta Korpela. World Journal of Gastroenterology. 2012(09)
本文编号：2986361
【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１不同结肠癌细胞ＦＸＲ及Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白水平的表达??
转染ＦＸＲ?ｓｉＲＮＡ?４８ｈ后提取蛋白，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的方法，检测｜３－ｃａｔｅｎｉｎ总??蛋白水平的变化。实验重复３次。结果显示，与对照组相比，沉默组ＨＴ－２９、Ｃａｃｏ－２、??ＨＣＴ－１１６细胞中ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的总蛋白水平无明显变化（图４）。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＦＸＲ?ｓｉＲＮＡ??（３－ｃａｔｅｎｉｎ??ＨＴ－２９??Ｐ－ａｃｔｍ?－?ＵＰＰ??Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??Ｃａｃｏ－２??ｐ－ａｃｔｉｎ??Ｐ－ｃａｔｅｎ，??ＨＣＴ＇１１６?一????ｐ－ａｃｔｉｎ??图４沉默ＦＸＲ对结肠癌细胞中Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ总蛋白水平的影响??３．?ＦＸＲ激动剂ＧＷ４０６４对结肠癌细胞增殖的影响??ＨＴ－２９、Ｃａｃｏ－２、ＨＣＴ－１１６结肠癌细胞分别经不同浓度ＦＸＲ激动剂ＧＷ４０６４?（１、??３、５ｕｍｏｌ／Ｌ）干预１２、２４、３６和４８ｈ，采用ＭＴＴ法检测细胞増殖能力的变化。结??果显示，ＧＷ４０６４对三种细胞株的增殖均有显著抑制作用，且随浓度的增加，其抑??制作用逐渐增强，提示抑制作用呈浓度和时间依赖性（图５－７，表８－１３）。??３０??
３、５ｕｍｏｌ／Ｌ）干预１２、２４、３６和４８ｈ，采用ＭＴＴ法检测细胞増殖能力的变化。结??果显示，ＧＷ４０６４对三种细胞株的增殖均有显著抑制作用，且随浓度的增加，其抑??制作用逐渐增强，提示抑制作用呈浓度和时间依赖性（图５－７，表８－１３）。??３０??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Inflammatory pathways in the early steps of colorectal cancer development[J]. Francesco Mariani,Paola Sena,Luca Roncucci. World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
[2]emerging role of the β-catenin-PPARγ axis in the pathogenesis of colorectal cancer[J]. Lina Sabatino,Massimo Pancione,Carolina Votino,Tommaso Colangelo,Angelo Lupo,Ettore Novellino,Antonio Lavecchia,Vittorio Colantuoni. World Journal of Gastroenterology. 2014(23)
[3]High-fat-induced intestinal permeability dysfunction associated with altered fecal bile acids[J]. Lotta K Stenman,Reetta Holma,Riitta Korpela. World Journal of Gastroenterology. 2012(09)
本文编号：2986361
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