等温循环放大检测细胞内活性物质

发布时间：2021-01-20 16:31

　　随着医疗水平的发展,人类的平均寿命也随之延长,而癌症对于人类的威胁却日益突出,逐渐成为我国居民的第一死因。癌症的发现时期对于癌症病人的存活至关重要,因此,癌症的早期检测对于人类的健康至关重要。本文利用纳米粒子的优点及常用的循环放大方法的优点来检测癌细胞内的活性物质来实现对于癌症的早期检测。研究表明癌细胞和正常细胞相比,其中的miRNA和端粒酶的含量存在异常,故而可用来作为生物标记物,因此我们构建了检测细胞内miRNA及端粒酶的生物传感器,本论文具体包括三个部分:（1）我们开发了一种基于链置换扩增和杂交链式反应的miRNA检测新方法。利用聚合酶和切刻内切酶的辅助作用,目标miRNA与单链模板DNA结合,产生大量可诱导HCR的触发DNA。因此,设计的DNA扩增策略与SERS技术固有的高灵敏度相结合可以实现miRNA更低的检测限。该方法具有灵敏度高、通用性强、分析速度快、选择性高等特点,在生物分析和临床生物医学中具有检测痕量生物分子的巨大潜力。（2）我们设计了一种新的端粒酶检测信号放大策略。利用链置换反应和催化发夹循环生成更多的MB-DNA进而连接更多的拉曼探针,起到放大信号的作用。同时,利... 

【文章来源】：青岛科技大学山东省

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
    1.1 肿瘤及肿瘤标志物
        1.1.1 肿瘤
        1.1.2 肿瘤的治疗方法
        1.1.3 肿瘤标志物
        1.1.4 常用的癌症标志物测定要求
        1.1.5 常用的癌症标记物分类
            1.1.5.1 癌症蛋白质生物标记物
            1.1.5.2 癌症相关的酶失调
            1.1.5.3 基于核酸的生物标记物
            1.1.5.4 细胞代谢的小型化学产品
            1.1.5.5 直接分析癌细胞
    1.2 端粒酶
        1.2.1 端粒酶简介
        1.2.2 端粒酶检测进展
            1.2.2.1 体外端粒酶定量检测
            1.2.2.2 体内端粒酶成像检测
    1.3 miRNA
        1.3.1 miRNA简介
        1.3.2 miRNA检测方法进展
            1.3.2.1 miRNA体外检测
            1.3.2.2 miRNA成像检测
    1.4 循环放大方法
        1.4.1 杂交链式反应
        1.4.2 等温链置换反应
        1.4.3 滚环扩增
        1.4.4 酶辅助信号放大反应
        1.4.5 催化发夹反应
    1.5 本工作的意义及研究内容
第二章 双重循环放大SERS检测miRNA
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 试剂
        2.2.2 仪器
        2.2.3 金纳米粒子的制备
        2.2.4 磁珠（MB）的活化
        2.2.5 金纳米粒子功能化磁珠（MB-AuNPs）的合成
        2.2.6 发卡DNA（H1）在MB-AuNPs上的固定
        2.2.7 拉曼探针的制备
        2.2.8 miRNA信号放大反应
        2.2.9 SERS检测
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 实验原理
        2.3.2 金纳米粒子的表征
        2.3.3 拉曼探针的紫外-可见光谱表征
        2.3.4 实验可行性研究
        2.3.5 聚合酶和剪切酶浓度的优化
        2.3.6 反应温度的优化
        2.3.7 酶辅助扩增反应时间的优化
        2.3.8 miRNA的SERS检测
        2.3.9 miRNAlet-7a检测方法特异性的探究
        2.3.10 实际样品中miRNA的检测
    2.4 小结
第三章 熵驱动双重循环放大SERS检测端粒酶活性
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 试剂
        3.2.2 仪器
        3.2.3 金纳米粒子的制备
        3.2.4 细胞培养
        3.2.5 细胞内端粒酶的提取
        3.2.6 拉曼探针的制备
        3.2.7 端粒延伸反应
        3.2.8 循环放大反应
        3.2.9 SERS检测
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 实验原理
        3.3.2 金纳米粒子的表征
        3.3.3 实验可行性研究
        3.3.4 端粒酶反应温度的优化
        3.3.5 端粒酶反应时间的优化
        3.3.6 端粒酶前体浓度的优化
        3.3.7 端粒酶的SERS检测
        3.3.8 细胞内端粒酶的检测
    3.4 小结
第四章 基于三螺旋均相荧光检测端粒酶活性
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 试剂
        4.2.2 仪器
        4.2.3 金纳米粒子的制备
        4.2.4 AuNPs-三螺旋探针的制备
        4.2.5 循环放大反应
        4.2.6 荧光检测
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 实验原理
        4.3.2 实验可行性探究
        4.3.3 实验pH的优化
        4.3.4 端粒酶反应时间的优化
        4.3.5 金纳米粒子用量的优化
        4.3.6 端粒酶的荧光检测
    4.4 小结
结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文目录


【参考文献】：
期刊论文
[1]循环肿瘤细胞的研究进展[J]. 平伟,付向宁,孙威.  医学与哲学(临床决策论坛版). 2011(06)
[2]肿瘤的综合治疗方法[J]. 陈淑芹,金敬顺,陈霞.  医学信息(中旬刊). 2011(02)
[3]肿瘤基因治疗的研究进展[J]. 周冰,陈文斌.  齐鲁药事. 2009(02)



本文编号：2989385