CD90阳性细胞筛选及PI3K/AKT通路对其干细胞样特性影响的初步研究
发布时间：2021-01-20 16:49
目的：肝癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一,广西地区发病率更是高居中国的首位。近年来,基于肿瘤干细胞理论提出肿瘤治疗新型理念并广泛的在多种实质细胞和动物的体内展开实验研究。越来越多的证据支持肿瘤异质性的存在,而肿瘤干细胞为其根源。肿瘤干细胞来源于肿瘤细胞内一群数量极少量生长极度旺盛,有着强大的自我更新、无限增殖化分化、潜能、高度致成瘤性的细胞。此类细胞在肿瘤的发生、发展过程以及肿瘤治疗后的复发、对放化疗的耐药等方面,都起到了极为重要的作用。而在肿瘤细胞中其他的多数细胞不具备无限增殖潜能,几乎遵循的是短暂的分化成熟以后,最终发展为死亡的过程。我们认为肝癌细胞中也存在着这样一群肝癌干细胞,通过无血清悬浮成球培养,流式细胞技术能够筛选出肝癌干细胞,并进一步探讨PI3K/AKT信号通路对肝癌细胞系MHCC97L中CD90（Thy-1）阳性亚群细胞比例及干细胞特性的影响。方法：1.采用完全培养基和无血清培养基加入相关生长因子培养肝癌细胞系MHCC97L,分别进行贴壁和悬浮成球培养,收集相应细胞进行后续实验。2.糖原染色方法检测细胞球来源。3.流式细胞技术（flow cytometry）检测MHCC...
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
个人简历
摘要
ABSTRACT
前言
1 实验材料和实验主要器材
1.1 实验材料
1.2 实验主要器材
2 实验方法
2.1 细胞的悬浮球培养及传代
2.2 糖原染色
2.3 流式分选肝癌干细胞标志物CD90的表达量
+的表达量变化"> 2.4 流式细胞仪分选加入LY294002后CD90+的表达量变化
+亚群细胞和CD90-亚群细胞加入LY294002后的增值率"> 2.5 MTT法检测CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞加入LY294002后的增值率
+亚群细胞和CD90-亚群细胞经LY294002处理前与处理后肝癌干细胞相关干细胞基因CD90、SHP2的mRNA的表达"> 2.6 qRT-PCR检测CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞经LY294002处理前与处理后肝癌干细胞相关干细胞基因CD90、SHP2的mRNA的表达
+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白的免疫印迹表达"> 2.7 CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白的免疫印迹表达
2.8 平板克隆实验
2.9 裸鼠体内成瘤实验
2.10 裸鼠移植瘤免疫组化
2.11 统计学分析
3 结果
3.1 肝癌细胞系MHCC97L贴壁培养第3d和第7d的细胞形态
3.2 肝癌细胞系MHCC97L无血清成球培养第3d和第8d的细胞球形态
3.3 糖原染色结果
3.4 流式细胞仪检测CD90标志物在贴壁培养细胞和成球培养细胞中的表达量
+的表达量变化"> 3.5 流式细胞仪分选加入LY294002后CD90+的表达量变化
+亚群细胞和CD90-群细胞增殖率的影响"> 3.6 加入LY294004对CD90+亚群细胞和CD90-群细胞增殖率的影响
+亚群细胞和CD90-亚群细胞中肝癌干细胞相关基因CD90、SHP2表达量,以及经LY294002处理后表达量的变化"> 3.7 CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞中肝癌干细胞相关基因CD90、SHP2表达量,以及经LY294002处理后表达量的变化
+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白表达量"> 3.8 CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白表达量
3.9 平板克隆形成能力分析
+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠体内成瘤情况变化"> 3.10 加入LY294004前后CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠体内成瘤情况变化
+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠移植瘤CD90、SHP2、P-AKT、AKT的蛋白表达量"> 3.11 加入LY294002前后CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠移植瘤CD90、SHP2、P-AKT、AKT的蛋白表达量
4 讨论
参考文献
综述
参考文献
致谢
硕士期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌干细胞标志物最新进展[J]. 吴超,张金玲,杨盛力,赵志辉. 肝胆外科杂志. 2013(04)
[2]肝癌治疗新策略:肝癌干细胞靶向干预[J]. 李晓明,罗庆,宋关斌. 生物医学工程学杂志. 2013(04)
本文编号：2989409
【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
个人简历
摘要
ABSTRACT
前言
1 实验材料和实验主要器材
1.1 实验材料
1.2 实验主要器材
2 实验方法
2.1 细胞的悬浮球培养及传代
2.2 糖原染色
2.3 流式分选肝癌干细胞标志物CD90的表达量
+的表达量变化"> 2.4 流式细胞仪分选加入LY294002后CD90+的表达量变化
+亚群细胞和CD90-亚群细胞加入LY294002后的增值率"> 2.5 MTT法检测CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞加入LY294002后的增值率
+亚群细胞和CD90-亚群细胞经LY294002处理前与处理后肝癌干细胞相关干细胞基因CD90、SHP2的mRNA的表达"> 2.6 qRT-PCR检测CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞经LY294002处理前与处理后肝癌干细胞相关干细胞基因CD90、SHP2的mRNA的表达
+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白的免疫印迹表达"> 2.7 CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白的免疫印迹表达
2.8 平板克隆实验
2.9 裸鼠体内成瘤实验
2.10 裸鼠移植瘤免疫组化
2.11 统计学分析
3 结果
3.1 肝癌细胞系MHCC97L贴壁培养第3d和第7d的细胞形态
3.2 肝癌细胞系MHCC97L无血清成球培养第3d和第8d的细胞球形态
3.3 糖原染色结果
3.4 流式细胞仪检测CD90标志物在贴壁培养细胞和成球培养细胞中的表达量
+的表达量变化"> 3.5 流式细胞仪分选加入LY294002后CD90+的表达量变化
+亚群细胞和CD90-群细胞增殖率的影响"> 3.6 加入LY294004对CD90+亚群细胞和CD90-群细胞增殖率的影响
+亚群细胞和CD90-亚群细胞中肝癌干细胞相关基因CD90、SHP2表达量,以及经LY294002处理后表达量的变化"> 3.7 CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞中肝癌干细胞相关基因CD90、SHP2表达量,以及经LY294002处理后表达量的变化
+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白表达量"> 3.8 CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞中CD90、SHP2、P-AKT、AKT蛋白表达量
3.9 平板克隆形成能力分析
+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠体内成瘤情况变化"> 3.10 加入LY294004前后CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠体内成瘤情况变化
+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠移植瘤CD90、SHP2、P-AKT、AKT的蛋白表达量"> 3.11 加入LY294002前后CD90+亚群细胞和CD90-亚群细胞裸鼠移植瘤CD90、SHP2、P-AKT、AKT的蛋白表达量
4 讨论
参考文献
综述
参考文献
致谢
硕士期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]肝癌干细胞标志物最新进展[J]. 吴超,张金玲,杨盛力,赵志辉. 肝胆外科杂志. 2013(04)
[2]肝癌治疗新策略:肝癌干细胞靶向干预[J]. 李晓明,罗庆,宋关斌. 生物医学工程学杂志. 2013(04)
本文编号：2989409
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