C/EBP-δ对于人结直肠癌细胞增殖及裸鼠成瘤能力的影响研究
发布时间：2021-01-25 22:47
[目 的]研究C/EBP δ过表达、干扰对人结直肠癌体外细胞增殖以及裸鼠体内种植瘤的生长情况,肿瘤体积及瘤体重量的影响。[方 法]1.构建含C/EBP-δ过表达及C/EBP-δ干扰的慢病毒表达载体,转染人结肠癌Caco-2细胞系,荧光显微镜观察荧光是否表达,以明确是否转染成功。2.将C/EBP-δ过表达及C/EBP-δ干扰的慢病毒载体转染的人结肠癌Caco-2细胞系,运用CCK8试剂盒检测C/EBP-δ过表达和干扰慢病毒载体对细胞增殖的影响。3.将C/EBP-δ过表达及C/EBP-δ干扰的慢病毒载体转染的人结肠癌Caco-2细胞系,建立裸鼠皮下成瘤的模型,动态监测C/EBP-δ在裸鼠体内对肿瘤生长情况、肿瘤体积及瘤体重量的影响。[结 果]1.与正常对照组比较,过表达空载慢病毒转染组、干扰空载慢病毒转染组细胞增殖无明显变化;与过表达空载慢病毒转染组比较,C/EBP-δ 过表达慢病毒转染组细胞增殖能力降低;与干扰空载慢病毒转染组比较,C/EBP-δ干扰慢病毒转染组细胞增殖能力增加。2.与正常对照组比较,过表达空载慢病毒转染组、干扰空载慢病毒转染组细胞成瘤体积及重量均无明显变化;与过表达空载...
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．?３．１皮下瘤体体积动态生长曲线图??
聚体，进而行使ＤＮＡ结合功能。但是Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的ＤＮＡ结合功能域中碱性氨基酸区??缺少一段１１个氨基酸的碱性多肽，其结合ＤＮＡ的能力较弱，其ＤＮＡ结合能力相??较其他Ｃ／ＥＢＰ家族蛋白，依次为Ｃ／ＥＢＰ?Ｐ?＞Ｃ／ＥＢＰ?ａ?＞Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ。Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ迄今己??知仅有的一个全长蛋白质类型，Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的Ｎ端相较于其他Ｃ／ＥＢＰ成员仅表现出??＜２０％的序列同源性，而且Ｃ／ＥＢＰＳ具有明确的反式转录激活结构域，因此Ｃ／ＥＢＰ??Ｓ的大多数靶点基因的启动子被Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ所激活。图１展示了?Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的蛋白质??结构，并突出了与其他蛋白因子之间相互作用，即被内源性蛋白质所识别，而且??靶点基因可以通过Ｃ／ＥＢＰＳ反式转录激活结构域激活而实现。（图１）??ＦＢＸＷ７结合域?结合域??—?ＩＰ０４?Ｃ／ＥＢＰｓ??能区域?Ｉ?卜链?一??ＳＩＡＨ２结合域??图１?Ｃ／ＥＢＰＳ蛋白质的结构域及映射到Ｃ／ＥＢＰＳ结构域的相互作用因子，以及那些被证实的??存在相互作用的内源性蛋白因子己经包含在这个图中：ＳＷＨ２，?ＦＢＸＷ７，?ＦＡＮＣＤ２．?ＩＰ０４。??２?Ｃ／ＥＢＰ?６的生物学功能??Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ和Ｃ／ＥＢＰ家族的其他成员一样，以其独特的方式影响着生物信号的??传导。Ｃ／ＥＢＰＳ通过与其他Ｃ／ＥＢＰ家族成员以及其他含ｂＺｉｐ蛋白如Ｆｏｓ，?Ｊｕｎ和??ｃＡＭＰ应答元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）形成同源或异源二聚体来影响细胞变化ｈ。Ｃ／ＥＢＰ??５在细胞内形成多种同源和异源二聚体，从而大大增加了其靶基因的多样性。??Ｃ／ＥＢＰＳ长期以极低量存在于各种细胞中，有时甚至无法检测到，由于其可被许??多刺激诱导而进一步增多
以ＳＩＡＨ２依赖性方式聚泛素化，并且Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的Ｋ１２０Ａ残基是响应Ｓｒｃ／ＳＩＡＨ２信??号传导的聚泛素化和导致Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ降解所必需的，其中保守氨基酸Ａ１３７和Ｖ１３９??是Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ与ＳＩＡＨ２相互作用的结构域。目前仅在Ｓａｒｋａｒ的研究证实Ｓｒｃ激酶??通过ＳＩＡＨ２依赖性地下调Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ蛋白表达，这有助于肿瘤细胞中ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１蛋??白表达。这似乎从侧面证实了?Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ作为肿瘤抑制因子，下调ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表??达，进而抑制细胞发生转化及癌变（图２）。目前在多种肿瘤中发现了?ｃｙｃｌｉｎＤｌ??基因过表达和基因扩增，包括口腔癌Ｍ＇膀胱癌１５、甲状旁腺肿瘤？等。??ＳＫＩ６０Ｂ??丄??一一以?Ｕｂ?ｌｏｓ－??０／ＥＢＰ＜３?Ｏ／ＥＢＲｃＳ??Ｘ?Ｘ??Ｉ—ｅｓｓ?ｃｙｃｌｉｒｔ?Ｄ１?Ｍｏｒｏ?ｏｙｏｌｉｎ?Ｄ１??Ｌｅｓｓ?“ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ”?Ｍｏｒｅ?“ｔｒａｒ？ｓｆｏｒｒｒ？？ｄ，’??图２?ＳＩＡＨ２与Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ相关作用示意图??３．?２?ＳＩＡＨ２?与?ＨＩＦ－１?ａ?的关系??低氧诱导因子１?（ＨＩＦ－１）昏次被Ｓｅｍｅｎｚａ发现。ＨＩＦ－１是由对氧敏感的ａ亚??基和稳定表达的３亚基组成的异源二聚体，其生物效应主要是由ＨＩＦ－１?ａ亚基表??达。ＨＩＦ－ｌａ蛋白的基因位于１４号染色体（１４ｑ２１－２４），分子量为１２０ｋＤａ；?ＨＩＦ－??１?ａ主要存在于细胞核中，胞浆中的ＨＩＦ－１?ａ含量极少且几乎不发挥生物学功能。??虽然细胞内不断地合成ＨＩＦ－１?ａ，但是ＨＩＦ－１?ａ由于受到脯氨酰羟化酶（ＰＨＤ）等??１７泛素原蛋白酶体系统的作用而
本文编号：3000026
【文章来源】：昆明医科大学云南省
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３．?３．１皮下瘤体体积动态生长曲线图??
聚体，进而行使ＤＮＡ结合功能。但是Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的ＤＮＡ结合功能域中碱性氨基酸区??缺少一段１１个氨基酸的碱性多肽，其结合ＤＮＡ的能力较弱，其ＤＮＡ结合能力相??较其他Ｃ／ＥＢＰ家族蛋白，依次为Ｃ／ＥＢＰ?Ｐ?＞Ｃ／ＥＢＰ?ａ?＞Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ。Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ迄今己??知仅有的一个全长蛋白质类型，Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的Ｎ端相较于其他Ｃ／ＥＢＰ成员仅表现出??＜２０％的序列同源性，而且Ｃ／ＥＢＰＳ具有明确的反式转录激活结构域，因此Ｃ／ＥＢＰ??Ｓ的大多数靶点基因的启动子被Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ所激活。图１展示了?Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的蛋白质??结构，并突出了与其他蛋白因子之间相互作用，即被内源性蛋白质所识别，而且??靶点基因可以通过Ｃ／ＥＢＰＳ反式转录激活结构域激活而实现。（图１）??ＦＢＸＷ７结合域?结合域??—?ＩＰ０４?Ｃ／ＥＢＰｓ??能区域?Ｉ?卜链?一??ＳＩＡＨ２结合域??图１?Ｃ／ＥＢＰＳ蛋白质的结构域及映射到Ｃ／ＥＢＰＳ结构域的相互作用因子，以及那些被证实的??存在相互作用的内源性蛋白因子己经包含在这个图中：ＳＷＨ２，?ＦＢＸＷ７，?ＦＡＮＣＤ２．?ＩＰ０４。??２?Ｃ／ＥＢＰ?６的生物学功能??Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ和Ｃ／ＥＢＰ家族的其他成员一样，以其独特的方式影响着生物信号的??传导。Ｃ／ＥＢＰＳ通过与其他Ｃ／ＥＢＰ家族成员以及其他含ｂＺｉｐ蛋白如Ｆｏｓ，?Ｊｕｎ和??ｃＡＭＰ应答元件结合蛋白（ＣＲＥＢ）形成同源或异源二聚体来影响细胞变化ｈ。Ｃ／ＥＢＰ??５在细胞内形成多种同源和异源二聚体，从而大大增加了其靶基因的多样性。??Ｃ／ＥＢＰＳ长期以极低量存在于各种细胞中，有时甚至无法检测到，由于其可被许??多刺激诱导而进一步增多
以ＳＩＡＨ２依赖性方式聚泛素化，并且Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ的Ｋ１２０Ａ残基是响应Ｓｒｃ／ＳＩＡＨ２信??号传导的聚泛素化和导致Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ降解所必需的，其中保守氨基酸Ａ１３７和Ｖ１３９??是Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ与ＳＩＡＨ２相互作用的结构域。目前仅在Ｓａｒｋａｒ的研究证实Ｓｒｃ激酶??通过ＳＩＡＨ２依赖性地下调Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ蛋白表达，这有助于肿瘤细胞中ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１蛋??白表达。这似乎从侧面证实了?Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ作为肿瘤抑制因子，下调ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的表??达，进而抑制细胞发生转化及癌变（图２）。目前在多种肿瘤中发现了?ｃｙｃｌｉｎＤｌ??基因过表达和基因扩增，包括口腔癌Ｍ＇膀胱癌１５、甲状旁腺肿瘤？等。??ＳＫＩ６０Ｂ??丄??一一以?Ｕｂ?ｌｏｓ－??０／ＥＢＰ＜３?Ｏ／ＥＢＲｃＳ??Ｘ?Ｘ??Ｉ—ｅｓｓ?ｃｙｃｌｉｒｔ?Ｄ１?Ｍｏｒｏ?ｏｙｏｌｉｎ?Ｄ１??Ｌｅｓｓ?“ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ”?Ｍｏｒｅ?“ｔｒａｒ？ｓｆｏｒｒｒ？？ｄ，’??图２?ＳＩＡＨ２与Ｃ／ＥＢＰ?Ｓ相关作用示意图??３．?２?ＳＩＡＨ２?与?ＨＩＦ－１?ａ?的关系??低氧诱导因子１?（ＨＩＦ－１）昏次被Ｓｅｍｅｎｚａ发现。ＨＩＦ－１是由对氧敏感的ａ亚??基和稳定表达的３亚基组成的异源二聚体，其生物效应主要是由ＨＩＦ－１?ａ亚基表??达。ＨＩＦ－ｌａ蛋白的基因位于１４号染色体（１４ｑ２１－２４），分子量为１２０ｋＤａ；?ＨＩＦ－??１?ａ主要存在于细胞核中，胞浆中的ＨＩＦ－１?ａ含量极少且几乎不发挥生物学功能。??虽然细胞内不断地合成ＨＩＦ－１?ａ，但是ＨＩＦ－１?ａ由于受到脯氨酰羟化酶（ＰＨＤ）等??１７泛素原蛋白酶体系统的作用而
本文编号：3000026
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/3000026.html
