B7-H4对肝癌细胞凋亡和自噬的影响及机制研究
发布时间：2021-01-26 03:39
目的:B7-H4和自噬可以通过PI3K信号通路调节或诱导。然而,在肝细胞癌中B7-H4与自噬的关系仍未清楚。本课题的目的是研究肝细胞癌中B7-H4是否通过PI3K信号通路调节自噬。方法:siRNA敲低Huh7和Hep3B细胞B7-H4后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,western blot检测cleaved-caspase3、cleaved-PARP、BAX、BCL-2、LC3、P62、P-AKT、P-PI3K、P-m TOR和总AKT、PI3K、m TOR蛋白水平,MDC法检测自噬体。结果:敲低Huh7和Hep3B细胞B7-H4后,siRNA组与NC组相比,细胞增殖减少,细胞凋亡率增加;凋亡相关指标cleaved-caspase3、cleaved-PARP、BAX蛋白增加,P62蛋白降低;自噬相关指标LC3Ⅱ增加,Bcl2蛋白降低;MDC法可见siRNA组更多自噬体;AKT、PI3K、m TOR的磷酸化被抑制;siRNA组和NC组分别使用CQ抑制LC3降解后发现LC3Ⅱ仍然增加,使用3MA抑制PI3K后,发现细胞凋亡和自噬减弱。结论:B7-H4通过PI3K信...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
7-H4表达下调抑制HCC细胞增殖Figure1AandB.AftersiRNAinterference,theexpressionofB7-H4RNAlevelwas
重庆医科大学硕士研究生学位论文153.2B7-H4表达下调促进HCC细胞凋亡用流式细胞仪检测Huh7和Hep3B细胞凋亡，发现siB7-H4作用后，细胞凋亡率增加。siRNA组较NC组凋亡存在差异显著Huh7:6.11%vs2.96%,P<0.05;Hep3B:7.25%vs3.54%,P<0.05。在C-D图中，siB7-H4组较NC组凋亡相关蛋白cleavedcaspase3、cleavedPARP与BAX增加，BCL-2减少。ABCD图2B7-H4表达下调促进HCC细胞凋亡Figure2CellapoptosisratewasdeterminedbyflowcytometrywithAnnexinV-FITC(A-B).Theassayswererepeatedthrice,andillustratedasthemean±SD.**siRNAvsNC,P<0.05,***P<0.05.Expressionchangeofapoptosis-relatedgenesdetectedbywesternblotanalysisinHuh7andHep3BcellsafterB7-H4siRNAtreatment(CandD).*siRNAvsNC,P<0.05,**P<0.05,***P<0.05.
重庆医科大学硕士研究生学位论文17图3B7-H4表达下调促进HCC细胞自噬Figure3Expressionchangeofautophagy-relatedgenesdetectedbywesternblotanalysisinHuh7andHep3BcellsafterB7-H4siRNAtreatment(A-B).*siRNAvsNC,P<0.05,**P<0.05,***P<0.05.Expressionchangeofautophagy-relatedgenesdetectedbywesternblotanalysisinHuh7andHep3BcellsaftersiRNAand/orchloroquine(CQ)treatment(C-F).MDCstainingobservedbyfluorescencemicroscopeshowedthepresenceofalargenumberofautophagosomesinB7-H4(G).*siRNAvsNC,P<0.05,**P<0.05,***P<0.05.3.4B7-H4调节HCC细胞中的AKT/PI3K/mTOR途径用siRNA抑制B7-H4表达后，p-AKT,p-PI3Kandp-mTOR表达水平减少，而且，p-AKT/AKT,p-PI3K/PI3Kandp-mTOR/mTOR与NC组相比显著减少。AB图4B7-H4表达下调引起HCC细胞中的AKT/PI3K/mTOR改变Figure4ExpressionchangeofPI3K/AKT/mTORsignalingpathwayinHuh7andHep3BcellsafterB7-H4siRNAtreatment.**siRNAvsNC,P<0.05.3.5B7-H4调节自噬与凋亡通过PI3K信号通路
【参考文献】：
期刊论文
[1]Expression of B7-H4 and hepatitis B virus X in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J]. Bo Hong,Yun Qian,Hong Zhang,Yi-wen Sang,Lin-fang Cheng,Qi wang,Song Gao,Min Zheng,Hang-ping Yao. World Journal of Gastroenterology. 2016(18)
[2]PI3K/AKT信号通路的抑制促进B7-H4分子的核转移[J]. 宋慧,谢炜,练启慧,陈敏吉,徐荣,曾双,章良. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(11)
[3]B7-H4 expression is elevated in human U251 glioma stem-like cells and is inducible in monocytes cultured with U251 stem-like cell conditioned medium[J]. Lian-Jie Mo,Hong-Xing Ye,Ying Mao,Yu Yao,Jian-Min Zhang. Chinese Journal of Cancer. 2013(12)
本文编号：3000401
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：37 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
7-H4表达下调抑制HCC细胞增殖Figure1AandB.AftersiRNAinterference,theexpressionofB7-H4RNAlevelwas
重庆医科大学硕士研究生学位论文153.2B7-H4表达下调促进HCC细胞凋亡用流式细胞仪检测Huh7和Hep3B细胞凋亡，发现siB7-H4作用后，细胞凋亡率增加。siRNA组较NC组凋亡存在差异显著Huh7:6.11%vs2.96%,P<0.05;Hep3B:7.25%vs3.54%,P<0.05。在C-D图中，siB7-H4组较NC组凋亡相关蛋白cleavedcaspase3、cleavedPARP与BAX增加，BCL-2减少。ABCD图2B7-H4表达下调促进HCC细胞凋亡Figure2CellapoptosisratewasdeterminedbyflowcytometrywithAnnexinV-FITC(A-B).Theassayswererepeatedthrice,andillustratedasthemean±SD.**siRNAvsNC,P<0.05,***P<0.05.Expressionchangeofapoptosis-relatedgenesdetectedbywesternblotanalysisinHuh7andHep3BcellsafterB7-H4siRNAtreatment(CandD).*siRNAvsNC,P<0.05,**P<0.05,***P<0.05.
重庆医科大学硕士研究生学位论文17图3B7-H4表达下调促进HCC细胞自噬Figure3Expressionchangeofautophagy-relatedgenesdetectedbywesternblotanalysisinHuh7andHep3BcellsafterB7-H4siRNAtreatment(A-B).*siRNAvsNC,P<0.05,**P<0.05,***P<0.05.Expressionchangeofautophagy-relatedgenesdetectedbywesternblotanalysisinHuh7andHep3BcellsaftersiRNAand/orchloroquine(CQ)treatment(C-F).MDCstainingobservedbyfluorescencemicroscopeshowedthepresenceofalargenumberofautophagosomesinB7-H4(G).*siRNAvsNC,P<0.05,**P<0.05,***P<0.05.3.4B7-H4调节HCC细胞中的AKT/PI3K/mTOR途径用siRNA抑制B7-H4表达后，p-AKT,p-PI3Kandp-mTOR表达水平减少，而且，p-AKT/AKT,p-PI3K/PI3Kandp-mTOR/mTOR与NC组相比显著减少。AB图4B7-H4表达下调引起HCC细胞中的AKT/PI3K/mTOR改变Figure4ExpressionchangeofPI3K/AKT/mTORsignalingpathwayinHuh7andHep3BcellsafterB7-H4siRNAtreatment.**siRNAvsNC,P<0.05.3.5B7-H4调节自噬与凋亡通过PI3K信号通路
【参考文献】：
期刊论文
[1]Expression of B7-H4 and hepatitis B virus X in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J]. Bo Hong,Yun Qian,Hong Zhang,Yi-wen Sang,Lin-fang Cheng,Qi wang,Song Gao,Min Zheng,Hang-ping Yao. World Journal of Gastroenterology. 2016(18)
[2]PI3K/AKT信号通路的抑制促进B7-H4分子的核转移[J]. 宋慧,谢炜,练启慧,陈敏吉,徐荣,曾双,章良. 细胞与分子免疫学杂志. 2014(11)
[3]B7-H4 expression is elevated in human U251 glioma stem-like cells and is inducible in monocytes cultured with U251 stem-like cell conditioned medium[J]. Lian-Jie Mo,Hong-Xing Ye,Ying Mao,Yu Yao,Jian-Min Zhang. Chinese Journal of Cancer. 2013(12)
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