TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响及机制
发布时间：2021-01-26 07:01
目的:在课题组前期工作基础上,检测TGF-β1对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响;构建Lewis y抗原过表达或低表达的卵巢癌细胞系,检测TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌自噬和线粒体自噬的影响,并对其调控机制进行初步探讨,为卵巢癌的治疗寻找新的靶点提高理论依据。研究方法:1、通过Western blot检测不同浓度和时间点的TGF-β1作用下卵巢癌细胞自噬相关蛋白表达的变化。通过免疫荧光检测TGF-β1处理后卵巢癌细胞中LC3变化情况。添加自噬抑制剂氯喹（Chloroquine,CQ）阻断自噬流,通过Western blot、免疫荧光等方法观察TGF-β1作用后卵巢癌细胞自噬流的变化情况。瞬时转染双荧光标记的LC3腺病毒后检测TGF-β1作用下卵巢癌细胞自噬流的变化情况。通过TMRM染色检测TGF-β1作用前后卵巢癌细胞线粒体膜电位变化情况。继而通过Western blot检测不同浓度和时间点TGF-β1作用下对卵巢癌细胞线粒体自噬发生的影响。通过免疫荧光检测TGF-β1作用下线粒体自噬相关蛋白PINK1的表达情况。通过Annexin V/FITC流式方法检测不同浓度TGF-β1作...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 细胞系
2.1.2 主要材料
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 Western blotting检测TGF-β1 处理前后细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白表达水平
2.2.3 免疫细胞化学
2.2.4 线粒体膜电位
2.2.5 统计学分析
3 结果
3.1 TGF-β1对卵巢癌细胞自噬的影响
3.2 TGF-β1对卵巢癌细胞自噬流的影响
3.3 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体膜电位的影响
3.4 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响
3.5 TGF-β1对卵巢癌细胞凋亡的影响
3.6 添加自噬抑制剂后TGF-β1对卵巢癌细胞凋亡的影响
4 讨论
5 结论
第二部分 TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响
6 前言
7 材料与方法
7.1 材料
7.1.1 细胞系
7.1.2 主要材料
7.1.3 主要仪器
7.2 方法
7.2.1 细胞培养
7.2.2 细胞转染及稳转细胞系的构建
7.2.3 慢病毒感染构建稳定低表达细胞系
7.2.4 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞自噬相关蛋白的影响
7.2.5 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对线粒体膜电位的影响
7.2.6 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞线粒体自噬相关蛋白的影响
7.2.7 流式检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞凋亡的影响
7.2.8 统计学分析
8 结果
8.1 转染FUT1 基因前后Lewisy和 TGF-β1 变化情况
8.2 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对卵巢癌细胞自噬的影响
8.3 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对细胞线粒体膜电位的影响
8.4 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对细胞线粒体自噬的影响
8.5 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对卵巢癌细胞凋亡的影响
9 讨论
10 结论
第三部分 TGF-β1岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬影响的机制
11 前言
12 材料与方法
12.1 材料
12.1.1 细胞系
12.1.2 主要材料
12.1.3 主要仪器
12.2 方法
12.2.1 细胞培养
12.2.2 Western blotting检测TGF-β1对TAK1 的作用
12.2.3 干扰TAK1卵巢癌细胞系
12.2.4 干扰TAK1对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响
12.2.5 Lewisy抗原对干扰TAK1 对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响
12.2.6 干扰TAK1对MAPK通路及PI3K/Akt通路的影响
12.2.7 添加MEK及 PI3K通路抑制剂对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响
12.2.8 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对mTOR通路的影响
12.2.9 统计学分析
13 结果
13.1 TGF-β1对TAK1 表达的影响
13.2 干扰TAK1对卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬的影响
13.3 Lewisy抗原修饰下干扰TAK1 对卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬的影响
13.4 干扰TAK1 后对MAPK通路及PI3K/Akt通路的影响
13.5 添加MEK和 PI3K通路抑制剂对自噬和线粒体自噬的影响
13.6 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对mTOR通路的影响
14 讨论
15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]PINK1在黏液性上皮性卵巢肿瘤中表达的研究[J]. 刘川,王华芹,王慧敏,胡珍华,英焕春,林蓓. 现代肿瘤医学. 2014(02)
本文编号：3000681
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂和仪器
2.1.1 细胞系
2.1.2 主要材料
2.1.3 主要仪器
2.2 方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 Western blotting检测TGF-β1 处理前后细胞自噬及线粒体自噬相关蛋白表达水平
2.2.3 免疫细胞化学
2.2.4 线粒体膜电位
2.2.5 统计学分析
3 结果
3.1 TGF-β1对卵巢癌细胞自噬的影响
3.2 TGF-β1对卵巢癌细胞自噬流的影响
3.3 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体膜电位的影响
3.4 TGF-β1对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响
3.5 TGF-β1对卵巢癌细胞凋亡的影响
3.6 添加自噬抑制剂后TGF-β1对卵巢癌细胞凋亡的影响
4 讨论
5 结论
第二部分 TGF-β1的岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬的影响
6 前言
7 材料与方法
7.1 材料
7.1.1 细胞系
7.1.2 主要材料
7.1.3 主要仪器
7.2 方法
7.2.1 细胞培养
7.2.2 细胞转染及稳转细胞系的构建
7.2.3 慢病毒感染构建稳定低表达细胞系
7.2.4 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞自噬相关蛋白的影响
7.2.5 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对线粒体膜电位的影响
7.2.6 Westernblotting检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞线粒体自噬相关蛋白的影响
7.2.7 流式检测TGF-β1的Lewisy抗原修饰对细胞凋亡的影响
7.2.8 统计学分析
8 结果
8.1 转染FUT1 基因前后Lewisy和 TGF-β1 变化情况
8.2 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对卵巢癌细胞自噬的影响
8.3 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对细胞线粒体膜电位的影响
8.4 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对细胞线粒体自噬的影响
8.5 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对卵巢癌细胞凋亡的影响
9 讨论
10 结论
第三部分 TGF-β1岩藻糖基化修饰对卵巢癌细胞线粒体自噬影响的机制
11 前言
12 材料与方法
12.1 材料
12.1.1 细胞系
12.1.2 主要材料
12.1.3 主要仪器
12.2 方法
12.2.1 细胞培养
12.2.2 Western blotting检测TGF-β1对TAK1 的作用
12.2.3 干扰TAK1卵巢癌细胞系
12.2.4 干扰TAK1对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响
12.2.5 Lewisy抗原对干扰TAK1 对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响
12.2.6 干扰TAK1对MAPK通路及PI3K/Akt通路的影响
12.2.7 添加MEK及 PI3K通路抑制剂对卵巢癌细胞自噬和线粒体自噬的影响
12.2.8 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对mTOR通路的影响
12.2.9 统计学分析
13 结果
13.1 TGF-β1对TAK1 表达的影响
13.2 干扰TAK1对卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬的影响
13.3 Lewisy抗原修饰下干扰TAK1 对卵巢癌细胞自噬及线粒体自噬的影响
13.4 干扰TAK1 后对MAPK通路及PI3K/Akt通路的影响
13.5 添加MEK和 PI3K通路抑制剂对自噬和线粒体自噬的影响
13.6 TGF-β1的Lewis y抗原修饰对mTOR通路的影响
14 讨论
15 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]PINK1在黏液性上皮性卵巢肿瘤中表达的研究[J]. 刘川,王华芹,王慧敏,胡珍华,英焕春,林蓓. 现代肿瘤医学. 2014(02)
本文编号：3000681
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