控温联合曲尼司特对KATOⅢ胃硬癌细胞增殖及TGF-β表达影响的研究
发布时间：2021-01-27 14:20
目的:通过体外培养KATOⅢ人胃硬癌细胞株,同时利用不同的热疗温度处理KATOⅢ胃硬癌细胞株,模拟肿瘤热疗（41℃-43℃）环境,分别观察在37℃、40℃、41℃、42℃、43℃的环境以及有无曲尼司特作用下,癌细胞的增生及细胞中TGF-β mRNA表达水平的变化,从而为热疗及曲尼司特治疗胃硬癌寻找到更具针对性的实验依据和临床治疗提供新的思路。方法:取10块无菌塑料6孔板分为实验组和对照组,每组各5块孔板,并在每组孔板盖上依次标明37℃、40℃、41℃、42℃和43℃,然后将KATOⅢ人胃硬癌细胞悬液按照2.0 mL/孔,5.0×10 4 cell/mL的密度分别接种10块6孔板上的规定孔中,按照（2单位体积细胞液:1单位体积曲尼司特）比例分别在实验组孔板中加入1mL浓度为1.0mmol/L的Tranilast（曲尼司特）溶液,对照组分别加入1mL IMDM完全培养液,分别置于37℃、40℃、41℃、42℃和43℃,体积分数为0.05%的CO2培养箱中培养6小时后。最后分别采用Luna细胞计数器和RT-PCR法检测KATOⅢ人胃硬癌细胞在有无曲尼司特干预下不同温度培养时增殖情况和TGF-...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１显微镜下ＫＡＴＯｉｎ胃硬癌细胞形态观（１０Ｍ０）??
０．?３０ｇ琼脂糖，３０ｍＬ的１＊ＴＡＥ），充分加热使得??琼脂糖溶解，待冷却至６０°Ｃ时，将０．５?ｕＬ的核酸染料加入其中，充分混匀后进行倒胶??操作，注意操作轻柔；??２．往各已经提取好的ＲＮＡ中各分别取５ｕＬＲＮＡ溶液，按１：?５的比例与６＊ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ??充分混匀，置于１４０Ｖ恒压条件下进行ＲＮＡ电泳操作，待溴酚蓝向前迁移至总长２／５处时??停止电泳操作，并且在凝胶成像的系统下观察电泳图像。??条带由上至下依次为２８ｓ，１８ｓ，５ｓ。??对照组?实验组??图２总ＲＮＡ的琼脂糖凝胶电泳图??２．?２．?４．?３?ＲＮＡ?逆转录??以总ｍＲＮＡ为模板进行逆转录ｃＤＮＡ操作，具体反应体系组成见表３：??１４??
?南华大学硕士学位论文???表５?ｑＰＣＲ荧光定量反应体系??试剂?体积??Ｔｅｍｐｌａｔｅ?（反转录产物）?２?ｕＬ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ａ?（１０ｕＭ）?１?ｕＬ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｂ?（ｌＯｕＭ）?１?ｕＬ??ｄｄＨ２０?１１?ｕＬ??２Ｘ?ＳＹＢＧＲＥＥＮ?ＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ?１５?ｕＬ??（３）定量ＰＣＲ扩增程序：??Ｈ－ａｃｔｉｎ为内参照，反应体系为３０ｕＬ，ＰＣＲ反应条件为：９５°Ｃ预变性ｌＯｍｉｎ、??９５°Ｃ变性?１５ｓ、６０°Ｃ退火?１０ｓ、７２°Ｃ延伸?３０ｓ，共?４０?个循环。（ＴＧＦ－Ｐ?和?ａｃｔｉｎ?扩??增曲线见下图）??ｒｊｆｅｓ??ｍ－??１欲？??１Ｍ０－??炊－??＾?６９３－??＿．．一??．?Ｉ，?Ｉ?，ｎ?０??？诚＂?ｉ?ｉｉ?｜?１?ｉ?ｉ?１?１?ｌ?１?ｌ?ｉ?｜?ｉ?Ｉ?ｉ?＇?Ｉ?ｉｔｉ?Ｉ?｜?Ｔ?ｉ?１?１?｜?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｔ?ｉ?ｒ?ｉ?ｉ??１５?１０?１５?２０?２５?３０?３５?４３??Ｉ？??「Ｗ??图３?ＴＧＦ－Ｐ扩增曲线图??１６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]低氧对人胃癌细胞p53异构体表达的影响及意义[J]. 潘光敏,申婷婷,陈宁,季万胜,高志星,代洪生,王津迪. 中国现代医学杂志. 2019(22)
[2]Tranilast inhibits TGF-β-induced collagen gel contraction mediated by human corneal fibroblasts[J]. Ye Liu,Xiao-Jing Zhao,Xiao-Shuo Zheng,Hui Zheng,Lei Liu,Ling-Bin Meng,Qin Li,Yang Liu. International Journal of Ophthalmology. 2018(08)
[3]Cytoreductive surgery and hyperthermic intraperitoneal chemotherapy in gastric cancer[J]. Ramakrishnan Ayloor Seshadri,Olivier Glehen. World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
[4]术前置泵区域动脉灌注化疗治疗晚期乳腺癌远期疗效分析[J]. 何建苗,马小军,赵华洲,张心慧,张庆军. 解放军医学杂志. 2014(10)
[5]胃硬化型癌的特征与治疗[J]. 胡祥. 中国肿瘤临床. 2013(22)
[6]热疗逆转乳腺癌细胞系耐药的实验研究[J]. 张霖,杨毅,魏熙胤,史玉荣,王瑞,刘洪隐,姚智,牛瑞芳. 中华乳腺病杂志(电子版). 2007(04)
[7]进展期胃癌术中温热灌洗及置泵术后灌注化疗的临床研究[J]. 曹志宇,蒲永东,何建苗. 中国肿瘤临床与康复. 2007(02)
[8]结缔组织生长因子在胃硬癌形成机制中的作用[J]. 肖在鹏,胡祥,杨佩满,邵淑娟,胡军,赵瑾瑶. 中国医师进修杂志. 2007 (17)
本文编号：3003200
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１显微镜下ＫＡＴＯｉｎ胃硬癌细胞形态观（１０Ｍ０）??
０．?３０ｇ琼脂糖，３０ｍＬ的１＊ＴＡＥ），充分加热使得??琼脂糖溶解，待冷却至６０°Ｃ时，将０．５?ｕＬ的核酸染料加入其中，充分混匀后进行倒胶??操作，注意操作轻柔；??２．往各已经提取好的ＲＮＡ中各分别取５ｕＬＲＮＡ溶液，按１：?５的比例与６＊ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ??充分混匀，置于１４０Ｖ恒压条件下进行ＲＮＡ电泳操作，待溴酚蓝向前迁移至总长２／５处时??停止电泳操作，并且在凝胶成像的系统下观察电泳图像。??条带由上至下依次为２８ｓ，１８ｓ，５ｓ。??对照组?实验组??图２总ＲＮＡ的琼脂糖凝胶电泳图??２．?２．?４．?３?ＲＮＡ?逆转录??以总ｍＲＮＡ为模板进行逆转录ｃＤＮＡ操作，具体反应体系组成见表３：??１４??
?南华大学硕士学位论文???表５?ｑＰＣＲ荧光定量反应体系??试剂?体积??Ｔｅｍｐｌａｔｅ?（反转录产物）?２?ｕＬ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ａ?（１０ｕＭ）?１?ｕＬ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｂ?（ｌＯｕＭ）?１?ｕＬ??ｄｄＨ２０?１１?ｕＬ??２Ｘ?ＳＹＢＧＲＥＥＮ?ＰＣＲ?Ｍａｓｔｅｒ?Ｍｉｘ?１５?ｕＬ??（３）定量ＰＣＲ扩增程序：??Ｈ－ａｃｔｉｎ为内参照，反应体系为３０ｕＬ，ＰＣＲ反应条件为：９５°Ｃ预变性ｌＯｍｉｎ、??９５°Ｃ变性?１５ｓ、６０°Ｃ退火?１０ｓ、７２°Ｃ延伸?３０ｓ，共?４０?个循环。（ＴＧＦ－Ｐ?和?ａｃｔｉｎ?扩??增曲线见下图）??ｒｊｆｅｓ??ｍ－??１欲？??１Ｍ０－??炊－??＾?６９３－??＿．．一??．?Ｉ，?Ｉ?，ｎ?０??？诚＂?ｉ?ｉｉ?｜?１?ｉ?ｉ?１?１?ｌ?１?ｌ?ｉ?｜?ｉ?Ｉ?ｉ?＇?Ｉ?ｉｔｉ?Ｉ?｜?Ｔ?ｉ?１?１?｜?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?Ｉ?ｔ?ｉ?ｒ?ｉ?ｉ??１５?１０?１５?２０?２５?３０?３５?４３??Ｉ？??「Ｗ??图３?ＴＧＦ－Ｐ扩增曲线图??１６??
【参考文献】：
期刊论文
[1]低氧对人胃癌细胞p53异构体表达的影响及意义[J]. 潘光敏,申婷婷,陈宁,季万胜,高志星,代洪生,王津迪. 中国现代医学杂志. 2019(22)
[2]Tranilast inhibits TGF-β-induced collagen gel contraction mediated by human corneal fibroblasts[J]. Ye Liu,Xiao-Jing Zhao,Xiao-Shuo Zheng,Hui Zheng,Lei Liu,Ling-Bin Meng,Qin Li,Yang Liu. International Journal of Ophthalmology. 2018(08)
[3]Cytoreductive surgery and hyperthermic intraperitoneal chemotherapy in gastric cancer[J]. Ramakrishnan Ayloor Seshadri,Olivier Glehen. World Journal of Gastroenterology. 2016(03)
[4]术前置泵区域动脉灌注化疗治疗晚期乳腺癌远期疗效分析[J]. 何建苗,马小军,赵华洲,张心慧,张庆军. 解放军医学杂志. 2014(10)
[5]胃硬化型癌的特征与治疗[J]. 胡祥. 中国肿瘤临床. 2013(22)
[6]热疗逆转乳腺癌细胞系耐药的实验研究[J]. 张霖,杨毅,魏熙胤,史玉荣,王瑞,刘洪隐,姚智,牛瑞芳. 中华乳腺病杂志(电子版). 2007(04)
[7]进展期胃癌术中温热灌洗及置泵术后灌注化疗的临床研究[J]. 曹志宇,蒲永东,何建苗. 中国肿瘤临床与康复. 2007(02)
[8]结缔组织生长因子在胃硬癌形成机制中的作用[J]. 肖在鹏,胡祥,杨佩满,邵淑娟,胡军,赵瑾瑶. 中国医师进修杂志. 2007 (17)
本文编号：3003200
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